低HDL血症の病因の細胞生物学的研究

低HDL血症发病机制的细胞生物学研究

• 批准号: 10770573
• 负责人: 辻田 麻紀
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770573/
• 关键词: HDL; LCAT; CETP; perβHDL; 細胞コレステロール搬出; マウス; apolipoprotein Al; cholesterol efflux; probucol; HDL代謝; RT-PCR

研究目的:Lecithin:cholesterol acyltransferase(LCAT)はHDL上でcholesterolをアシル化し、cholesterylester transfer protein(CETP)はこれをリポ蛋白質中に分配する。元来CETPを欠くマウスにこれを導入してヒトに近づけ、LCATをノックアウトする事によってヒトLCAT欠損症のモデルを作成して、その病態を研究する。特に我々が報告したアポリポ蛋白質によるcholesterol搬出の産物であるpreβ-HDLに注目する。研究計画・結果:1.CETP transgenic LCAT knockout mouseの作成。現在我々が所有するヒトCETP trancgenic miceはヒトCETP遺伝子をβ-アクチンプロモーターに連結した発現ベクターを用いて形成され、またLCAT knockout miceはLCATのexon1の部位をneo遺伝子に置き換えて作成されている。これらを掛け合わせ、CETP transgenic/LCAT knockout mouseのコロニーを作成する。遺伝子型はtailDNAより同定し、最終的にCETP(+/+)、LCAT(-/-)の遺伝子型を持つマウス群を作成した。2.血漿中リポ蛋白質の解析。血漿中リポ蛋白質の解析は高速液体クロマトグラフィーを用い、CETP transgenic mouse、LCAT knockout mouse、並びにCETP transgenic LCAT knockout mouseのVLDL、LDL、HDLのcholesterol、リン脂質、トリグリセライドをオンラインで測定、分析した。LCAT(-/-)マウスではCETPの発現の有無に関わらずHDLは観察されず、低HDL血症を示した。LCAT(+/-)ではCETPの発現していないマウスでは野生型とほぼ同値のHDLが見られたが、CETP発現マウスではその発現量によりHDLが大きく低下していた。このことより血中HDL量はLCATとCETPの発現量の比により変化する事が観察された。3.血漿中preβ-HDLの測定システムの開発。現在HDLの新生源として注目されているpreβ-HDLは主に2次元電気泳動によって測定されているが、我々の研究室ではpreβHDLにのみ反応するペプチド抗体を用いて血漿中に微量に存在するpreβ-HDLを測定する系を確立中である。

Objective:Lecithin: cholesteryl transferase (LCAT) is responsible for cholesterol protein distribution in HDL and cholesterylester transfer protein(CETP). CETP has been introduced into the market for a long time, and LCAT has been developed into a disease. In particular, we report that cholesterin is the product of beta HDL. 1. Construction of CETP transgenic LCAT knockout mouse. Now we have all the CETP trancgenic mice that have the CETP gene beta-link to the LCAT knockout mice and the LCAT knockout mice that have the LCAT exon1 site to the neo gene to the LCAT knockout mice. The CETP transgenic/LCAT knockout mouse is designed to be a mouse. The gene type is tailDNA, and the final CETP(+/+), LCAT(-/-) and gene type are created. 2. Analysis of plasma proteins. Analysis of plasma proteins in high-speed liquid chromatography, CETP transgenic mouse, LCAT knockout mouse, and CETP transgenic LCAT knockout mouse VLDL, LDL, HDL cholesterol, lipids, lipid analysis, analysis. LCAT(-/-) indicates the presence or absence of CETP, HDL, and hypoHDL. LCAT(+/-) is the expression of CETP, which is the same as wild-type, CETP and HDL. The ratio of HDL levels in the blood to CETP levels was observed. 3. Development of a system for measuring preβ-HDL in plasma. Now, the source of HDL generation has been studied, and the determination of pre-β-HDL in primary 2-D electrophoresis has been carried out. Our laboratory has established a system for the determination of pre-β-HDL in plasma in trace amounts, using antibodies against pre-β-HDL.

项目成果

Gordon A Francis,Maki Tsujita and Timothy Terry: "Apolipoprotein Al efficiently binds to and mediates cholesterol and Phospholipid efflux from human but not rat aortic smooth muscle cells"Biochemistry. 38. 16315-16322 (1999)

Gordon A Francis、Maki Tsujita 和 Timothy Terry：“载脂蛋白 A1 有效结合并介导人类而非大鼠主动脉平滑肌细胞的胆固醇和磷脂流出”生物化学。