白血球の機能発現におけるコフィリンの役割に関するアンチセンス法による解析

反义法分析肌动蛋白丝切蛋白在白细胞功能表达中的作用

• 批准号: 10771310
• 负责人: 安達 玲子
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: National Institute of Health Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10771310/
• 关键词: 白血球; コフィリン; アンチセンスオリゴDNA; 細胞骨格; 細胞内情報伝達

本研究は、細胞骨格制御タンパク質であるコフィリンについてアンチセンスオリゴDNAの標的となるmRNA上の配列を確定し、コフィリン量を減少させた細胞を用いて白血球機能発現におけるコフィリンの役割を解析することを目的とする。前年度においては、アンチセンス配列及び細胞への投与方法の検討を行った。mRNAの翻訳開始コドンを含む領域4種類、有効配列のコンピューター予測から5種類のオリゴDNA(ホスホロチオエート修飾型)を用意した。細胞への導入率の検討のため蛍光標識したものも用意した。細胞は、マクロファージ様に分化誘導したU-937細胞など、ヒト由来の白血球系細胞を用いた。細胞への投与は、高濃度(10μM程度)のオリゴDNA単独で、あるいは低濃度(1μM程度)のオリゴDNAと少量の遺伝子導入試薬を併用して行った。蛍光標識したオリゴDNAを投与した細胞を共焦点レーザー走査蛍光顕微鏡で観察したところ、オリゴDNAが細胞内に取り込まれていることが確認され、また、遺伝子導入試薬を併用した場合の方が細胞への導入効率がよいことが示された。今年度は、アンチセンス配列について、前年度の予備的な結果を踏まえてさらに検討し、翻訳開始コドンを含む領域(20塩基)に対する配列が有効であるという結果が得られた。また、ヒト由来の細胞のみでなくマウス由来のJ774.1細胞(マクロファージ様)においても、同領域に対する配列が有効であることが示され、コフィリンのアンチセンス領域を確定することができた。

The aim of this study is to determine the mRNA alignment of DNA targets in the cellular framework, reduce the amount of DNA, and analyze the function of leukocytes in the cellular framework. In the past year, we have conducted a study on the allocation of drugs, drugs, and methods for the injection of drugs. The mRNA translation starts with 4 types of DNA, 5 types of DNA, and 5 types of DNA. The introduction rate of the cell line was determined by the light source. Cell differentiation and differentiation of U-937 cells Cell injection is performed in combination with high concentration (about 10μM) of Ollida DNA alone, and low concentration (about 1μM) of Ollida DNA and a small amount of gene introduction test drugs. The results showed that there was no significant difference between the two groups. This year's budget allocation is in the middle, and the previous year's budget allocation is in the middle. J774.1 cell (s) from which the cell originated (s) are located (s) in the same domain (s) and are arranged (s) in the same domain (s).

项目成果

K.Nagaishi,R.Adachi et al.: "Participation of cofilin in opsonized zymosan-triggered activation of neutrophil-like HL-60 cells"Journal of Biochemistry. 125巻. 891-898 (1999)

K. Nagaishi、R. Adachi 等人：“肌动蛋白丝切蛋白参与调理酶聚糖触发的嗜中性粒细胞样 HL-60 细胞的激活”，《生物化学杂志》，第 125 卷，第 891-898 卷（1999 年）。

K.Nagaishi,R.Adachi et al.: "Herbimycin A inhibits both dephosphorylation and translocation of cofilin induced by opsonized zymosan in macrophagelike U937 cells"Journal of Cellular Physiology. 180巻. 345-354 (1999)

K. Nagaishi、R. Adachi 等人：“Herbimycin A 抑制巨噬细胞样 U937 细胞中调理酵母聚糖诱导的丝切蛋白去磷酸化和易位”，《细胞生理学杂志》180. 345-354 (1999)。