血液網膜関門新規実験系の開発と輸送機能解析

新型血视网膜屏障实验系统的开发及转运功能分析

• 批准号: 10771316
• 负责人: 細谷 健一
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10771316/
• 关键词: 血液網膜関門; 眼; 条件的不死化細胞株; P-糖蛋白質; 乳酸輸送; モノカルボン酸輸送; MCT1; MCT2; 温度感受性SV40T抗原遺伝子導入トランスジェニックラット; 網膜; T-抗原; 不死化細胞クローン; GLUT-1; グルコース輸送

温度感受性SV40T抗原遺伝子導入トランスジェニックラットから樹立した条件的不死化網膜毛細血管内皮細胞(TR-iBRB)はRT-PCR法により血管内皮細胞のマーカーであるvon Willebrand factor mRNAの発現が示された。さらに、acetylated LDLの取り込みによりscavenger receptorの発現が示唆された。Western blot法によりP-糖蛋白質が発現していること、及びRT-PCR法によりそのmRANであるmdr1a,mdr1b,mdr2が発現していることが示された。TR-iBRBにおける[^<14>C]L-lactateの取り込みはpH 依存性、温度依存性、及び濃度依存性(Km=1.7mM)を示した。この取り込みは、エネルギー代謝阻害剤であるsodium azide、2,4-dinitrophenolにより有意に阻害された。さらにH^+/モノカルボン酸共輸送系を阻害するα-cyano-4-hydroxycinnamic acid及びプロトノフォアであるFCCPにより有意に阻害された。一方、DIDS、NA^+非存在下では阻害されなかった。種々の芳香族及び脂肪族のモノカルボン酸において[^<14>C]L-lactateの取り込みは阻害されたことにより、H^+濃度勾配を駆動力とするモノカルボン酸輸送系が機能していることが示唆され、RT-PCR法によりmonocarboxylate transporter1(MCT1)及びMCT2の発現が示された。さらに、NHE1mRNAの発現が示され、amilorideにより[^<14>C]L-lactateの取り込みは阻害された。以上の結果から、TR-iBRB2はH^+/L-lactate共輸送系が機能していることが明らかとなり、NHEがプロトン濃度勾配を形成していることが示唆された。

Expression of von Willebrand factor mRNA in endothelial cells of immature retinal capillary (TR-iBRB) induced by temperature sensitive SV40T antigen gene was demonstrated by RT-PCR. The expression of scavenger receptor was detected in the presence of acetylated LDL. P-glycoprotein was detected by Western blot and by RT-PCR. TR-iBRB <14>is pH dependent, temperature dependent, and concentration dependent (Km= 1.7 mM). The metabolic inhibitor is sodium azide and 2,4-dinitrophenol. The H^+/H ^+/H A party, DIDS, NA^+ in the absence of Aromatic and <14>aliphatic species are identified as monocarboxylate transporter1(MCT1) and MCT2 by RT-PCR. In addition, NHE1 mRNA expression was detected and amiloride <14>was detected. As a result, TR-iBRB2 has a function of H^+/L-lactate co-transport system.

项目成果

T.Terasaki: "The blood-brain barrier efflux transporters as a detoxifying system for the brain." Adv.Drug Deliv.Rev.(in press). (1998)

T.Terasaki：“血脑屏障流出转运蛋白作为大脑的解毒系统。”

T.Terasaki: "The blood-brain barrier efflux transporters as a detoxifying system for the brain"Adv.Drug Deliv.Rev.. 36. 195-209 (1999)

T.Terasaki：“血脑屏障外流转运蛋白作为大脑的解毒系统”Adv.Drug Deliv.Rev.. 36. 195-209 (1999)

K.Hosoya: "Nucleotide stimulation of Cl secretion in the pigmented rabbit conjunctiva"J.Pharmacol.Exp.Ther.. 291. 53-59 (1999)

K.Hosoya：“色素兔结膜中 Cl 分泌的核苷酸刺激”J.Pharmacol.Exp.Ther.. 291. 53-59 (1999)