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シグナルトラップ法を用いたイモリ精巣からの増殖・分化因子のクローニング

使用信号捕获法从蝾螈睾丸中克隆生长和分化因子

基本信息

批准号：
10780463
负责人：
山本卓
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

1.昨年シグナルトラップ法により選別した7クローンのシグナル配列のうち2クローン(S118,F103)の全長cDNAをライブラリーからクローニングした。S118の全長は1500bpで単一のオープンリーディングフレームが見られ、シグナル配列が予想されるアミノ酸配列のN末端に確認されたが、配列全体では既知の遺伝子との相同性は見られなかった。一方F103全長は2000bpでオープンリーディングフレームが検出されたが、予想されるアミノ酸配列中にシグナル配列は見られなかった。配列を詳細に検討したところ、シグナル配列はcDNA中に逆向きに挿入されていた。おそらくF103は、スクリーニングの際に逆向きにベクターに入り、偶然疎水性のアミノ酸として翻訳されシグナル配列として働いたと考えられる。このようなクローンが他にも存在すると考えられ、別の方法でさらなる絞り込みが必要と考えられる。現在、S118については全長cDNAを発現ベクターに組み込み、COS細胞に導入・分泌タンパク質を作製中である。2.7クローンの精原細胞期での発現が下垂体ホルモンのFSHによってコントロールされているかどうかを調べるために、精原細胞の精巣断片をFSH存在下で一週間培養してその過程での発現変化をモニターした。クローンの特異的プライマーを設計し、0,1,3,5,7日目の精巣断片から調整した総RNAを鋳型としてRT-PCRをおこなった。その結果、S61がFSHによって発現が誘導され、5日後発現が減少することがわかった。また、S118は1日目に発現が増加して以後徐々に減少した。今後は、FSHによって発現制御をうける遺伝子を優先的に解析していく予定である。

1. Last year, the full-length cDNA of S118,F103 was selected from 7 different genes. S118 is 1500bp in length, and the sequence of S118 is identical to the sequence of S118. The total length of F103 is 2000bp, and it is expected to be arranged in the acid sequence. The sequence is described in detail below. F103, the time to reverse, the occasional water loss, the time to reverse, the time to reverse, the time to reverse. This is the first time I've ever seen someone else. Now, S118 is in the process of developing full-length cDNA, introducing it into COS cells, and secreting it into COS cells. 2.7 The development of spermatogonia during the period of culture in the presence of FSH, and the development of spermatogonia fragments during the period of culture in the presence of FSH. The gene fragments were designed for 0, 1, 3, 5 and 7 days after the gene fragment was detected. Results: S61 was found to be induced by FSH and decreased after 5 days. S118 has increased since then. In the future, FSH will be developed in order to determine the priority of analysis.