ダイズ貯蔵タンパク質コングリシニンの液胞輸送シグナルと認識機構の解析

大豆贮藏蛋白伴大豆球蛋白的液泡运输信号及识别机制分析

• 批准号: 11760063
• 负责人: 丸山 伸之
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11760063/
• 关键词: 液胞輸送シグナル; タンパク質貯蔵液胞; コングリシニン; ダイズタンパク質

本研究では、ダイズ貯蔵タンパク質コングリシニンの液胞へのターゲティングシグナルの特定とシグナル認識機構の究明を目的とする。昨年度は、コングリシニンのα′サブユニットの変異型をモデル植物(アラビドプシス)で発現させ、それらの種子細胞中での局在性を免疫化学的に調べることにより、α′サブユニットのシグナルの存在領域の同定を行った。今年度は、α′サブユニットの変異型の未解析のコンストラクトとともにβサブユニットの変異型の解析を行った。1.形質転換体の作成と発現タンパク質の分子集合能プロ領域、エクステンション領域、糖鎖全てを欠失させたα′サブユニットと野生型及び糖鎖、C末端6残基をそれぞれ欠失させたα′サブユニットの遺伝子をアラビドプシスに導入し、薬剤選抜によりすべてのコンストラクトにおいて形質転換体を得ることに成功した。それらの完熟種子からの抽出液を用いてショ糖密度勾配遠心分離とそれに引き続くウエスタンブロッティングを行うことにより、全ての発現タンパク質がアラビドプシス種子中で正しく分子集合していることを示した。2.ターゲティングシグナルの存在領域の同定発現タンパク質が種子中でタンパク質貯蔵液胞へ輸送されているかを調べるために、抗α′及びβ抗体を用いたアラビドプシス完熟種子の免疫電子顕微鏡観察を行った。その結果、全ての変異型α′及びβサブユニットが野生型と同様にタンパク質貯蔵液胞由来のプロテインボディーに局在していることを確認した。本研究により、コングリシニンの液胞輸送シグナルはC末端6残基を除くコア領域に存在しているということが明らかとなった。

In this study, the quality of the storage system was reducedゲティングシグナルのspecific and とシグナルKnowing the purpose of the institution. Last year's は、コングリシニンのα′サブユニットの変 special shape The をモデル plant (アラビドプシス) is now a kind of させ、それらのThe locality and immunochemistry of the sub-cells are the same as those in the immunochemical field, and the α′ ササブユニットのシグナルのexistence field is the same. This year's は、α′サブユニットの変different type のコンストラクトとともにβサブユニットの変different type のanalytic を行った. 1. The field of molecular collective energy and the field of morphological change of bodyン domain, sugar-locked full-length させたα′サブユニットと wild type and び-glycolock, C-terminal 6 residuesをそれぞれ无码させたα′サブユニットの伝子をアラビドプシスに importedし、薬剤选抜によりすべてのコンストラクトにおいてShape and quality転転体をgetることにsuccessした. The extraction liquid of the ripe seeds of the それらの is extracted from the いてショsugar density and the telecentric separation is carried out.を行うことにより, 全ての発成タンパク性がアラビドプシス子中で正しくmoleculeassembleしていることをshowした. 2. The field of existence of the ターゲティングシグナルの同定発 appear the タンパク性が中 でタンパク性色攵 Liquid Cell へ Transportation されてThe いるかをべるために, anti-α′ and びβ antibodies were used to observe the lines of いたアラビドプシス ripe seeds with an electron microscope. The result of その, all ての変 isotype α′ and びβサブユニットが wild type and the same 様にタンパThe origin of the substance storage liquid cell is confirmed by the のプロテインボディーにbureau in the していることを. In this study, the C-terminal 6 residues of シグナルは were transported into the vacuole of により and コングリシニンの. The existence of the base area is the existence of the field.