ダイズ貯蔵タンパク質コングリシニンの液胞輸送シグナルと認識機構の解析

大豆贮藏蛋白伴大豆球蛋白的液泡运输信号及识别机制分析

• 批准号: 11760063
• 负责人: 丸山 伸之
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11760063/
• 关键词: 液胞輸送シグナル; タンパク質貯蔵液胞; コングリシニン; ダイズタンパク質

本研究では、ダイズ貯蔵タンパク質コングリシニンの液胞へのターゲティングシグナルの特定とシグナル認識機構の究明を目的とする。昨年度は、コングリシニンのα′サブユニットの変異型をモデル植物(アラビドプシス)で発現させ、それらの種子細胞中での局在性を免疫化学的に調べることにより、α′サブユニットのシグナルの存在領域の同定を行った。今年度は、α′サブユニットの変異型の未解析のコンストラクトとともにβサブユニットの変異型の解析を行った。1.形質転換体の作成と発現タンパク質の分子集合能プロ領域、エクステンション領域、糖鎖全てを欠失させたα′サブユニットと野生型及び糖鎖、C末端6残基をそれぞれ欠失させたα′サブユニットの遺伝子をアラビドプシスに導入し、薬剤選抜によりすべてのコンストラクトにおいて形質転換体を得ることに成功した。それらの完熟種子からの抽出液を用いてショ糖密度勾配遠心分離とそれに引き続くウエスタンブロッティングを行うことにより、全ての発現タンパク質がアラビドプシス種子中で正しく分子集合していることを示した。2.ターゲティングシグナルの存在領域の同定発現タンパク質が種子中でタンパク質貯蔵液胞へ輸送されているかを調べるために、抗α′及びβ抗体を用いたアラビドプシス完熟種子の免疫電子顕微鏡観察を行った。その結果、全ての変異型α′及びβサブユニットが野生型と同様にタンパク質貯蔵液胞由来のプロテインボディーに局在していることを確認した。本研究により、コングリシニンの液胞輸送シグナルはC末端6残基を除くコア領域に存在しているということが明らかとなった。

这项研究旨在确定靶向信号对大豆储存的蛋白共聚物的液泡，并研究信号识别的机理。去年，在模型植物（拟南芥）中表达了共素素的α''亚基突变形式，并在免疫化学上检查了它们在种子细胞中的定位，以鉴定α'Aunit信号的区域。今年，我们分析了β亚基的突变形式，以及α'亚基突变形式的未分析构建体。 1。将所有分子收集的蛋白质，延伸区域和分子的分子收集的转化子和基因创建中，将表达蛋白的延伸区和聚糖引入拟南芥中，以及用于α'Aunit的基因，在所有野生类型中，Glycans和6 C-终端的残留物在其上都均取得了成功，并在其上均无作用，并在其上均取得了成功，并均无作用。选择。蔗糖密度梯度离心，然后使用来自这些成熟种子的提取物进行蛋白质印迹，表明所有表达的蛋白质均在拟南芥种子中正确地分子组成。 2。鉴定存在靶向信号的区域，以研究是否将表达的蛋白转运到种子中的蛋白质存储液泡，使用抗α'和β抗体对完全成熟的拟南芥种子上进行免疫电子显微镜。结果，已经确认所有突变体α'和β亚基都定位于源自蛋白质储存液泡的蛋白质体，类似于野生型。这项研究表明，除六个C末端残基外，核心区域中存在液泡转运信号。