新しい二酸化炭素固定化反応系の構築-二酸化炭素固定化能を有する新規融合酵素(乳酸脱水素酵素-リンゴ酸酵素)の創出-

新型二氧化碳固定反应体系的构建 - 具有二氧化碳固定能力的新型融合酶（乳酸脱氢酶-苹果酸酶）的创建 -

• 批准号: 11760080
• 负责人: 杉森 大助
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Fukui National College of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11760080/
• 关键词: P.diminuta; リンゴ酸酵素; 二酸化炭素固定化; クローニング; PCR増幅; 二酸化炭素; Pseudomonas diminuta

本研究では,まず二酸化炭素固定能を有するPseudomonas diminuta由来リンゴ酸酵素遺伝子を獲得することを目指した.リンゴ酸酵素遺伝子をクローニングするためにまず本酵素のアミノ酸配列を調べることを試みた.現在までのところN末端アミノ酸配列10残基(H_2N-TDKMTPQAAL)が明らかとなった.現在,内部アミノ酸配列解析を試みている.そこで,アミノ酸配列解析と平行してショットガンクローニング法ならびにPCR法を行った.ショットガンクローニング法では,形質転換体が現在のところ得られていない.PCR法では,他生物種由来リンゴ酸酵素間で相同性の高い部分からPCRプライマーを設計することによりPCR増幅を行った.その結果,630塩基対の増幅断片が得られた.この増幅断片をプラスミドベクターに組み込み,大腸菌を形質転換し,このDNA断片の塩基配列を解析した.次に,これをプローブとしてサザンハイブリダイゼーション解析を行った結果より,Pst Iを用いてサブゲノムライブラリーの作製を行うことを決定した.今後は,リンゴ酸酵素遺伝子の獲得を目指し,まずサブゲノムライブラリーの作製を行い,コロニーハイブリダイゼーションにより目的遺伝子を含むクローンの選抜,遺伝子の塩基配列解読を試みる予定である.

In this study, diacid carbon fixation has the origin of Pseudomonas diminuta, acid enzyme, acid enzyme and so on. I don't know how to treat this enzyme. I don't know. I don't know. At present, 10 residues (H_2N-TDKMTPQAAL) of N-terminal amino acid have been identified. At present, the internal acid configuration analysis is in order to solve the problem. Parallelism, PCR, acid, acid. In this paper, the method is used, and the method is now available. PCR method is used to detect the homogeneity of acid enzymes in the high temperature part of the PCR environment. The PCR profile is measured. The result of the experiment showed that the fragment of 630 μ m was found to be fine. The size of the fragments, the size of the body, the shape of the fungus, the size of the DNA fragment and the base column were analyzed. For the second time, you need to analyze the results of the row. Pst I use the command to determine the results of the decision. In the future, you need to know if you want to know that you are going to be able to do something.

项目成果

D.Sugimori,T.Dake,S.Nakamura: "Microbial degradation of disodium terephthalate by alkaliphilic Dietzia sp.strain GS-1"Biosci.Biotechnol.Biochem.. 64・12. 2709-2711 (2000)

D.Sugimori、T.Dake、S.Nakamura：“嗜碱性 Dietzia sp.strain GS-1 的对苯二甲酸二钠的微生物降解”Biosci.Biotechnol.Biochem.. 64・12 (2000)。

三原有真,杉森大助,蓮実文彦: "高負荷条件における植物油脂の高速分解と混合培養による油脂分解率の向上"石油学会誌. 43・6. 392-395 (2000)

Yuma Mihara、Daisuke Sugimori、Fumihiko Hasumi：“高负荷条件下植物油脂的快速分解和通过混合培养提高油分解率”日本石油学会杂志43・6（2000）。