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ヒト尿酸トフンスポーター遺伝子のクローニングと機能解析

人尿酸转运蛋白基因的克隆及功能分析

基本信息

批准号：
11770048
负责人：
細山田真
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyorin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度は、ヒト腎臓近位尿細管血管側に発現し、腎臓においてパラアミノ馬尿酸などの有機アニオンの分泌に関与する、有機アニオントランスポーターhOAT1の安定発現細胞株を作成し、^<14>C-尿酸を用いた輸送実験により、hOAT1は尿酸排泄に大きく関与しており、その輸送特性の変化が高尿酸血症の発症につながると考えられた。今年度はhOAT1のin vivoにおける尿酸輸送への寄与を検討する目的で、高尿酸血症患者におけるhOAT1遺伝子の変異について検討した。高尿酸血症患者27名を含む日本人72名のゲノムサンプルを用いてhOAT1遺伝子各エクソンにおける一塩基変異(single nucleotide polymorphism:SNPs)をキャピラリー電気泳動を用いた多色蛍光PCR-SSCP法にて検出し、変異のあるサンプルについてはダイレクトシークエンスによりSNPs部位の同定を行った。その結果51非翻訳領域に2ケ所のSNPsと1ケ所のvariant、第5イントロンと第8イントロンに1ケ所ずつのintron SNPs、第6エクソンにアミノ酸変異を伴う1ケ所のcoding SNPsを認めた。hOAT1遺伝子の5非翻訳領域は第1イントロン相当配列がスプライスされずに残っているものと考えられ、ゲルシフト解析により結合タンパクの存在が示唆され、発現量に変化を与えるregulatory SNPsである可能性がある。しかしながら、高尿酸血症患者群と対照群の間で統計的に有意な変異の存在は認められなかった。

In the previous year, the renal stasis on the proximal urinary capillary vascular side was present, and the renal stasis was on the urinary capillary vessel side. Organic Ammonium secretion and hydration, Organic Ammonium hydrochloric acid hOAT1 stability and stability are now detailed Cell lines are produced, ^<14>C-uric acid is used for transport, and hOAT1 is used for uric acid excretion. The big きくSeki and しており, そのtransport characteristics の変化がhyperuricemia の発 syndrome につながると考えられた. This year's hOAT1 is in vivo and the purpose of uric acid transport is the same as that of patients with hyperuricemia. 27 patients with hyperuricemia, 72 Japanese patients, and 72 Japanese patients were treated with a single nucleotide using the hOAT1 gene. polymorphism: SNPs) using polychromatic optical PCR-SSCP method using electrophoresisて検出し、変义のあるサンプルについてはダイレクトシークエンスによりSNPs partsの同定を行った.そのResults 51 non-translated fields に2ケSOのSNPsと1ケSOのvariant, 5th イントロンと 8th イントロンに1ケSO ずつのintron SNPs, the 6th エクソンにアミノ acid 変different を companion う 1 ケのcoding SNPs を recognized めた. hOAT1 伝子の5 non-translation field は 1st イントロン fairly matched がスプライスされずに residual っているものと考えられ, ゲルシフトanalytic によりcombination of タンパクのexistent がshow され, 発现quantity に変化を and えるregulatory SNPs are also possible.しかしながら、Hyperuricemia patient group and と対毾群の间でstatistics are intended to be different and exist はcognizeめられなかった.