ヒトがん細胞におけるストレス蛋白HSP90細胞増殖制御

应激蛋白HSP90对人类癌细胞增殖的调节作用

• 批准号: 11770124
• 负责人: 橋口 明典
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770124/
• 关键词: ストレス蛋白; HSP90; 抗がん剤; 細胞増殖; ストレス応答

1.HSP90の細胞増殖、熱ストレス応答における機能をHSP90との会合分子の点から、詳細にする目的でmycタグを付加したHSP90をNIH3T3細胞に遺伝子導入し、以下の知見を得た。1)サイクリン遺伝子の発現をRNA protection assayにて検討したところcyclinA_2およびcyclinD_3の発現低下がみられた。2)NIH3T3-HSPは対照と比較して、geldanamycin、doxorubicinによる細胞死の抑制がみられた。3)NIH3T3-HSPは対照と比較して、熱ストレスに対する耐性の低下がみられた。4)NIH3T3-HSPにおける免疫沈降法で、導入遺伝子産物とHSF-1の会合を認めた。5)HSF-1の細胞内局在は、コントロールでみられる熱ショック後核内移行が、NIH3T3-HSPでは抑制された。2.HSP90と各種抗がん剤との会合をリアルタイム分子間相互作用解析装置BIACORE2000を用いて検討した。精製されたヒスチジンタグ付加HSP90をNTA tip上に固相化し、抗がん剤とHSP90との会合をBIACORE2000にて検討したところ、doxorubicinが濃度依存性にHSP90と会合することが明らかとなった。以上の結果を、第89回日本病理学会総会(2000,大阪)、第59回日本癌学会総会(2000,横浜)、第23回日本分子生物学会総会(2000,神戸)、Cold Spring Harbor Laboratory Meeting,"Molecular chaperones ＆ the heat shock response"(2000,New York)にてそれぞれ発表した。3.HSP90変異体を導入したトランスジェニックマウスを作成し、2ラインを得た。現在これを解析中である。

1. Cell proliferation, gene expression and function of HSP90 were investigated. The results showed that HSP90 and NIH3T3 cells were successfully transfected into HSP90 cells. 1) RNA protection assay for detection of cyclinA_2 and cyclinD_3 2)NIH3T3-HSP inhibits cell death by comparison with geldanamycin and doxorubin. 3) NIH3T3-HSP is resistant to radiation and heat stress. 4)NIH 3T3-HSP assay, immunoprecipitation assay, recombinant protein and HSF-1 assay. 5)HSF-1 is localized in the nucleus and inhibited by NIH3T3-HSP. 2. HSP90 and BIACORE2000 are used for molecular interaction analysis. HSP90 was added to BIACORE2000 in a concentration-dependent manner. These results were presented at the 89th General Meeting of the Japanese Pathological Society (Osaka, 2000), the 59th General Meeting of the Japanese Cancer Society (Yokohama, 2000), the 23rd General Meeting of the Japanese Molecular Biology Society (Kobe, 2000), and Cold Spring Harbor Laboratory Meeting,"Molecular chaperones & the heat shock response"(New York, 2000). 3. HSP90 is introduced into the system. Now the analysis is in progress.

项目成果

橋口 明典: "ストレス蛋白HSP90の細胞増殖およびアポトーシスにおける機能"日本癌学会総会記事. 90・Suppl. 154 (1999)

Akinori Hashiguchi：“应激蛋白HSP90在细胞增殖和凋亡中的功能”日本癌症协会大会文章90・增刊154（1999）。

橋口明典: "抗がん剤標的としての分子シャペロンHSP90"日本癌学会総会記事. 91・Suppl. 184 (2000)

Akinori Hashiguchi：“分子伴侣 HSP90 作为抗癌药物靶标”日本癌症协会大会文章 91·Suppl.184（2000 年）。

橋口明典: "ストレス蛋白HSP90の細胞増殖およびアポトーシスにおける機能"日本癌学会総会記事. 90・Suppl. 154 (1999)

Akinori Hashiguchi：“应激蛋白HSP90在细胞增殖和凋亡中的功能”日本癌症协会大会文章90・增刊154（1999）。

Yamada T: "Function of 90-kDa heat shock protein in cellular differentiation of human embryonal carcinoma cells."In Vitro Cell Dev Biol Anim.. 36(2). 139-46 (2000)

Yamada T：“90-kDa 热休克蛋白在人胚胎癌细胞细胞分化中的功能。”体外细胞开发生物动画.. 36(2)。

橋口明典: "HSP90の細胞増殖における機能と抗癌剤との会合"日本病理学会会誌. 89・1. 147 (2000)

Akinori Hashiguchi：“HSP90在细胞增殖中的功能及其与抗癌药物的关联”日本病理学会杂志89・1（2000）。