がん細胞膜抗原を認識するヒトモノクローナル抗体の網羅的作成

全面打造识别癌细胞膜抗原的人单克隆抗体

• 批准号: 16790215
• 负责人: 橋口 明典
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790215/
• 关键词: ヒト抗体; 肺小細胞癌; 肝細胞癌

SCID-huマウスを用いた肝細胞癌特異的ヒト抗体phageライブラリーについて、panning、回収されたファージクローンの検討を行ったが、特異性に関して十分なものが、得られなかった。肝細胞とファージの親和性の強さが示唆されたため、細胞株の変更と、より容易な系によるpanning状況の検討を行った。1.培養細胞株を使用したpanning法の再検討より容易な系にてpanning条件を検討する目的で、CD26をSCID-huマウスで免疫、作製したヒト抗体phageライブラリーを用い、CD26発現、Jurkat細胞に特異的に結合するscFvクローンを得た。この時、本来CD26を発現していないJurkat細胞による非特異的クローンの吸収を行った。2.肺小細胞癌特異的ヒト抗体phageライブラリーの作製1.肺小細胞癌株H889をSCID-huマウスに免疫し、ヒト抗体phageライブラリーを作製した。細胞株をそのままアジュバントともに腹腔内投与し、膜分画の精製は行わなかった。2.H889に対するpanningの前に、上記、Jurkatで検討した条件で、肺腺癌細胞株A549による非特異的クローンの吸収を行った。吸収、Panning操作を3回繰り返すことで、H889に結合するクローンを多数得た。スクリーニングにはwhole-cell ELISAを用いた。3.上記クローンのうち、A549に対して、H889により結合力が強いクローンを選別、獲得した。確率としては、2.で得られたクローンの約1/3であった。

SCID-hu is used to detect hepatocellular carcinoma-specific antibodies. Phage, panning, and detection of hepatocellular carcinoma are very important. The affinity of liver cells is strongly expressed, and the cell lines are easily changed. 1. Culture of cell lines using the panning method for re-evaluation, easy to determine the panning conditions for the purpose of CD26 SCID-hu immunization, production and use of antibody phase, CD26 detection, Jurkat cell-specific binding scFv In this case, CD26 was originally discovered in Jurkat cells, and non-specific absorption was performed. 2. 1. The production of SCID-hu-specific antibody phage-specific 1. The production of SCID-hu-specific antibody phage-specific 1. The production of SCID-hu-specific antibody phage-specific 1. Cell lines were injected intraperitoneally and purified by membrane fractionation. 2. H889 cell line was used to detect the presence and absence of non-specific cells in lung adenocarcinoma cell line A549. The suction and Panning operations are performed in three cycles, and the H889 is combined with the above operations. Whole-cell ELISA 3. Note: A549 and H889 have strong binding force. 2. It is about 1/3 of the time.