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法医学的諸試料におけるDNA多型検出効率に関する研究

法医样本DNA多态性检测效率研究

基本信息

批准号：
11770226
负责人：
黒崎久仁彦
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tokyo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770226/
关键词：
DNA多型検出効率法医学 PCR DNAの断片化 DNA contamination シリカ抽出

项目摘要

本年度は法医人類学的試料からのDNA多型検出効率を高めるDNA抽出・精製法についての比較検討を行った。DNAの断片化が進んでいると考えられる試料(陳旧血痕など)および土中より発見された白骨体(古代遺跡出土骨を含む)について、従来報告されている各種の方法(フェノール・クロロホルム抽出、シリカ抽出、その他各社の抽出精製キット)によりDNA抽出・精製を行ったところ、STR等のDNA多型の検出感度が最も高かったのはシリカ抽出であり、特にHoss and Paaboが報告したもの(Nucl.Acids Res.21,3913-14,1993)の成績が最も良好であった。シリカ抽出により得られたDNAは、収量の点ではその他の方法に比べて劣っているケースも見られたが、その場合でも、結果的にDNA多型の検出感度は高くなっていた。この結果は、シリカによる抽出がDNAの断片化が進んでいる試料からのDNA多型検出を行う上で、(特にDNAの精製度という点において)非常に優れた方法であることを示唆しているものと考えられた。なお、シリカ抽出の原理を用いた抽出精製キットにおいても、同様に結果は良好であった。さらに、本研究においてHoss and Paaboの方法について検討したところ、試料の種類によっては(特に古人骨の場合)BSA濃度を変化させることにより、DNA多型の検出感度を2倍以上高められることを確認した。また本研究では、古人骨などの試料に付着した外来DNAによるcontaminationの防止方法についても検討した。このような試料の場合、DNA抽出操作の前にあらかじめその表面に一定量以上の紫外線を照射しておくことにより、付着していた外来DNAが分解除去された結果、多型検出時に見られた(contaminationに基づく)ダブルピークを解消できることが明らかになった(現在論文投稿中)。

This year's Forensic Anthropology sample has a high extraction efficiency of DNA polytypes and a comparison of DNA extraction and purification methods. DNA fragmentation test sample (old blood stain test sample) Bones (bones unearthed from ancient ruins, including bones), and various methods of reporting various methods (フェノール・クロロホルム Extraction, Sarika Extraction, Nota Corporation's Extraction and Refined Sedo) DNA Extraction and Refined Seikoところ, STR and other DNA polytype の検 sensitivities are the highest, かったのはシリカ extracted であり, 特にHoss and Paaboがreportしたもの(Nucl.Acids Res.21,3913-14,1993) has the best results. The method of extracting the DNA of the シリカにより and obtaining the られたDNA and collecting the amount is inferior to the べてっているケースも见られたが, そのoccasion でも, the resulting にDNA polytype の検出sensitivity は高くなっていた.このRESULTSは、シリカによるExtractionがDNAのFragmentationがんでいるSampleからのDNA polytype 検出を行う上で、( The special DNA precision system is a very good method and the method is very good. The principles of extraction of naru and saru are extracted and refined with sauna, and the results of the same are good sauna.さらに、This study においてHoss and Paabo's method, method, and type of sample, type of sample, BS The A concentration has been changed and the DNA polytype has been confirmed to be more than 2 times more sensitive. The purpose of this study is to use ancient human bones as samples and to prevent contamination of foreign DNA. In the case of the test sample, a certain amount of the surface of the sample before the DNA extraction operation The above-mentioned ultraviolet rays are used to decompose foreign DNA. As a result, the polytype 検出时に见られた(contaminationにbasedづく)ダブルピークをsolved the できることが明らかになった (the paper is currently being submitted).