強力な好酸球遊走因子5-oxo-ETEの受容体遺伝子の単離とその性状、発現の解析

强效嗜酸性粒细胞趋化因子5-oxo-ETE受体基因的分离及其特性和表达分析

• 批准号: 11770252
• 负责人: 岸本 成史
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770252/
• 关键词: 5-oxo-eicosatetraenoic acid; 好酸球; 白血球遊走因子; 受容体; cDNAクローニング; Gタンパク質; 遊走因子; G-タンパク質

平成11年度中において、Gタンパク質共役型受容体に属する既知の白血球遊走因子受容体群のcDNA配列をもとにして作製した縮重オリゴヌクレオチドをプローブとしてGeneTrapper cDNA positive selecti On systemを用いて種々の白血球遊走因子受容体のcDNAを濃縮し、これらを迅速且つ広範にクローニングする方法を開発したが、本年度はこの方法を応用してヒト白血球cDNAライブラリーより5-oxo-ETE受容体のクローニングを試みた。COS-7細胞またはHEK293細胞を受容細胞として白血球遊走因子受容体cDNA濃縮ライブラリーをトランスフェクションし、細胞内カルシウム応答を指標として5-oxo-ETE受容体cDNAをスクリーニングしたところ、陽性クローンは得られなかった。5-oxo-ETEは百日咳毒素非感受性のGタンパク質を介して細胞内カルシウム応答を引き起こす事を明らかにしているが、この情報伝達経路に関与していると考えられているPLCβ2がCOS-7細胞やHEK293細胞ではほとんど発現していない事がわかり、PLCβ2がない為に陽性の応答が見られなかった可能性が浮上した。現在、ヒトPLCβ2 cDNAクローンの入手にとりかかっているところである。5-oxo-ETE受容体cDNAのクローニングと同時に、好酸球における5-oxo-ETEに対する応答性の調節についても検討を行なった。私はこれまでに、好酸球の強力な遊走因子であるPAFに対する応答性およびPAF受容体の発現が、アレルギー性炎症に深く関わっていると考えられているインターロイキン-5(IL-5)や腫瘍壊死因子(TNF-α)の刺激により増大する事を明らかにしている。今回、健常人末梢血好酸球をIL-5またはTNF-αで12時間刺激した際の5-oxo-ETEに対する応答性(細胞内カルシウム応答)について調べたところ、PAFに対する応答性とは異なりTNF-α刺激による変化は見られなかったが、IL-5刺激により応答性が2倍以上増大することが明かとなった。IL-5で30分間のみ刺激した場合はこの応答性の増大は見られなかったことから、PAFの場合と同様に情報伝達経路のプライミングではなく、受容体の発現レベルでの調節によるものである可能性が考えられた。

In the middle of 2011, the cDNA alignment of the known leukocyte migration factor receptor group, which belongs to the GTANKUKU This year, the method was used to test the 5-oxo-ETE receptor. COS-7 cells and HEK293 cells are receptor cells, and leukocyte migration factor receptor cDNA concentration and intracellular response are indicators of 5-oxo-ETE receptor cDNA concentration and response. 5-oxo-ETE is not sensitive to pertussis toxin, but it can be detected in cells with high sensitivity, such as PLCβ2, COS-7 cells and HEK293 cells. Now, the PLCβ2 cDNA is in the hands of the people. 5-oxo-ETE receptor cDNAs can be used to regulate the response of 5-oxo-ETE receptors. The response to PAF and the development of PAF receptors are closely related to the development of inflammatory response and the stimulation of TNF-5 (IL-5) and TNF-α. The response of IL-5 to TNF-α and IL-5 stimulation increased by more than 2-fold in both healthy and normal subjects. IL-5:30 minutes of stimulation, increase in response, increase in response, increase in response,

项目成果

Takayuki Sugiura,Seishi Kishimoto et al.: "Evidence that 2-arachidonoylglycerol but not N-palmitoy lethanolamine or anadamide is the physiological ligand for the cannabinoid CB2 receptor"J.Biol.Chem.. 275. 605-612 (2000)

Takayuki Sugiura、Seishi Kishimoto 等人：“证据表明 2-花生四烯酰甘油而非 N-棕榈酰乙醇胺或 anadamide 是大麻素 CB2 受体的生理配体”J.Biol.Chem.. 275. 605-612 (2000)