小児肝芽腫の発生・進展に関与する遺伝子異常解明のための分子遺伝学的研究

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肝芽腫における分子遺伝学的な予後因子および癌化機序解明の糸口を探ることを目的とし、遺伝子の構造異常(欠失、増幅、および転座)の検出と検討をを試みた。固形腫瘍に共通する特徴として、染色対分析でmetaphase像が得られにくい点が遺伝子解析を困難とさせている理由の1つである。今回我々は、この問題点を解決し、さらに、retrospectiveな解析を可能とさせるため、fluorescence in situ hybridization(FISH)法と、comparative genomic hybridization(CGH)法を用いた染色体解析を行う点を特色とした。また、CGHの感度を高めるために、正常組織の混入をさけ腫瘍部を選択的に採取する目的で、対象はホルマリン固定パラフィン包埋組織とし、組織像と対比しながら、腫瘍部位を回収した。具体的には、厚切り切片(50μm)をXyleneで脱パラ後、ヘマトキシリンで軽く染め、連続切片でのHE像を参考に、立体顕微鏡下に目的の腫瘍部位を小型メス(釣り針を使用)で切除、回収し、Proteinase K(200μg/ml)で消化後ホモゲナイジャーで単離した細胞浮遊液を作成し、CGH用のDNA抽出、およびFISH用のスメア標本を作製した。平成12年度にはこの抽出DNAを用いCGH解析を行うと共に、スメア標本でのFISHで2番染色体の数的異常を中心に検討する予定である。