三次元培養を用いた嚢胞腎責任遺伝子導入細胞の形態解析

使用三维培养对引入囊性肾病基因的细胞进行形态学分析

• 批准号: 11770607
• 负责人: 望月 俊雄
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Hokkaido University (2000)Tokyo Women's Medical University (1999)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770607/
• 关键词: 多発性嚢胞腎; ADPKD; PKD1; PKD2; ポリシスチン; MDCK培養細胞; 遺伝子導入

常染色体優性遺伝性多発性嚢胞腎(ADPKD)は遺伝性腎疾患の中でも最も頻度の高い疾患で、その責任遺伝子としてPKD1遺伝子とPKD2遺伝子が同定されているが、その機能についてはまだ解明されていない。今回私たちは細胞レベルでPKD蛋白(ポリシスチン)がどのように振る舞い、そして尿細管細胞の形態形成においてどのような機能を有しているのかを検討する。昨年度は、尿細管細胞の一種であるLLCPK細胞およびMDCK細胞の培養系を確立し、発現ベクター(pCEP4およびpcDNA3.1)に組み込んだPKD2遺伝子の全長cDNAをリポゾーム法により遺伝子導入を行い、細胞から採取したRNAを用いてノザンブロット解析を行い、その発現を確認した。そこで今年度は、ヒトPKD2遺伝子に加えて、マウスpkd1遺伝子の全長cDNA(約13kb)をクローニングし、発現ベクター(pCI vector)に組み込むことに成功した。そこで、MDCK細胞をコラーゲンゲル内での3次元培養に行い、コントロールとして無添加の場合に嚢胞形成が起こること、またHGF(Hepatocyte growth factor)を添加することにより管腔形成されることを確認した。しかし、pkd1全長およびPKD2全長DNAや変異挿入発現ベクターについてのMDCK細胞への遺伝子導入については、コラーゲンゲル内での3次元培養を行ったが、いずれも嚢胞形成を認めており、無添加の場合と同じ結果であった。実際に遺伝子発現が認められるのかどうか確認する必要があり、今後の課題とした。

Autosomal dominant polycystic kidney disease (ADPKD) is one of the most common, most frequent, and most responsible inherited renal diseases.伝子として PKD1 伝子とPKD2 伝子が同定されているが、その function についてはまだ解明されていない. This time the private cell たちはレベルでPKD protein (ポリシスチン) がどのように Vibration る Dance い, そThe morphology of the urinary tubule cells is determined by the function of the urine tubule cells. Last year, a culture system for LLCPK cells and MDCK cells was established for urinary tubule cells, and a group of urinary tubular cells (pCEP4 pcDNA3.1) was established. The full-length cDNA of the PKD2 gene was introduced into cells using the method The RNA is collected and analyzed using the RNA analysis method, and the RNA is confirmed using the RNA.そこでThis year's は, ヒトPKD2 伝子に加えて, マウスpkd1 伝子のFull-length cDNA (about 13kb) をクローニングし, 発行ベクター(pCI vector)に组み込むことにsuccessした.そこで, MDCK cell をコラーゲンゲル内での3-dimensional culture に行い, コントロールHepatocyte HGF (Hepatocyte) when no additives are added growth factor)することによりThe lumen is formed and confirmedした.しかし, pkd1 full-length およびPKD2 full-length DNA や変insert 発开ベクターについてのMDCK cells への伝子 introduced については, コラーゲンゲル内での3-dimensional culture を行ったが, いずれも嚢综合をcognition めており, no additives, the same result であった. It's necessary to confirm the situation and the future tasks.