胆管癌に対するMUC1特異的スーパー抗原を用いた免疫療法の確立

使用MUC1特异性超抗原治疗胆管癌的免疫疗法的建立

• 批准号: 11770687
• 负责人: 片寄 友
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770687/
• 关键词: 胆管癌; scFV; アデノウイルス; MUC1; スーパー抗原

本年度は、抗MUC1抗体のHybridoma MUSE11よりVH、VL鎖をPCRにて単離し一本鎖抗体scFvを作製を試みた。ScFvのcDNAを組込んだプラスミドを作製し、その蛋白発現をウエスタンブロットにて確認した。さらに、その集積、活性などをフローサイトメトリーにてscFvの特性を確認した。その結果の一部は、J Biochem(Tokyo)(1)に掲載され、抗MUC1抗体のscFvの特性は確認された。scFv-zeta鎖を組込むため、抹消血単核球(PBMNC)、あるいはPBMNCをサイトカインIL-2で刺激したリンパ球よりRT-PCR法にて単離を試みたが、特異的PCR産物が得られず、様々な方法を試行したがzeta鎖のサブクローニングは不成功に終わった。しかし、その代案として同時に施行していた、co-stimulation factorの一つである4-1BBLのサブクローニングは成功し、アデノウイルスAd5と相同置換部位を持ち、CMVプロモーターを持つshuttle vector(pAd5)に組込み、アデノウイルスベクターの特異性を検討した。

This year, the Hybridoma MUSE11, VH and VL locks of anti-MUC1 antibodies were tested for the production of anti-MUC1 scFv. ScFv cDNA sequence was identified by PCR. The characteristics of scFv were confirmed. Part of the results were reported in J Biochem(Tokyo)(1), and the characterization of the scFv of the anti-MUC1 antibody was confirmed. scFv-zeta locks are assembled, deleted, and PBMNC is used to stimulate IL-2. RT-PCR is used to isolate and test specific PCR products. The co-stimulation factor of 4-1BBL is applied simultaneously to the shuttle vector(pAd5), and the specificity of the co-stimulation factor is discussed.

项目成果

Katayose Y, et al.: "Functional construction of the anti-mucin core protein (MUC1) antibody MUSE11 variable regions in a bacterial expression system."J Biochem (Tokyo). 127(4). 673-679 (2000)

Katayose Y 等人：“细菌表达系统中抗粘蛋白核心蛋白 (MUC1) 抗体 MUSE11 可变区的功能构建。”J Biochem（东京）。