TrK導入髄芽腫細胞株のNGFによる分化と細胞死の決定機構解明

阐明 NGF 决定 TrK 导入的髓母细胞瘤细胞系分化和细胞死亡的机制

• 批准号: 11770779
• 负责人: 村垣 善浩
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770779/
• 关键词: medulloblastoma; retirioic acid; neurotrophin; trk; p75NTR; medullo blastoma; retinoic acid

平成11年度の実験で、髄芽腫細胞株D425(原発巣)とD458(播種細胞)にレチノイン酸処理を行ったところ、D425は細胞死をD458は神経細胞様分化を示した。RT-PCRでの検討で、D425とD458ともRA添加前からNeurotropinであるBDNF、NT3の発現が添加後も発現は持続し、受容体のtrkB、trkCはD425とD458ともRA添加後のみに発現がみられた。低親和性受容p75NTRは、RA添加後分化したD458にのみに発現していた。平成12年度の実験では、この分化を示したD458を長期培養した。レチノイン酸の週2回処理をしたところ約4週間から5週間で細胞同士が凝集塊を作り、その凝集塊同士が細胞体の5倍以上の突起で結合した。形態的には成熟神経細胞に酷似していた。その過程で細胞死が認められた為、DNA電気泳動を施行した所D425と同様、D458のRA処理細胞でもDNA ladderが認められ、細胞分化とともに細胞死が同時に起こっていることを示した。これは、Trk遺伝子を導入したD458trk細胞がリガンドであるNGFの添加で分化を示したが、細胞死を示さなかった結果とは異なった。P75NTRのMouse Monoclonal抗体を入手し免疫組織染色を施行した。D425のRA処理細胞は陰性であったが、D458のRA処理細胞では処理早期3日後以降、細胞表面に発現していることが示された。しかし、Western Blottingや免疫沈降法で、P75NTRの発現は発現量の問題か、抗体自体の問題か、陽性バンドが認められなかった。

In 2009, the cell lines D425 (original cell lines) and D458 (seed cells) were produced When treated with ノイン acid, the cells of D425 were killed and the differentiation of D458 cells was shown. RT-PCR, D425, D458, RA before addition, Neurotropin, BDNF, NT3 After the addition, the recipients are trkB, trkC, D425, D458, and RA. Low-affinity acceptor p75NTR, differentiated after addition of RA, D458 D458 is now available. In 2012, the long-term cultivation of D458 was carried out. The レチノイン acid treatment is performed twice a week, and the treatment lasts for about 4 weeks and 5 weeks. The morphology of the mature cells of には is very similar to that of していた. The process of cell death is recognized, and the DNA electrophoresis is performed. D425 is the same as D425, and the RA-treated cells of D458 are used for DNA. ladderがcognizeめられ、cell differentiationとともにcell deathがsimultaneously riseこっていることをshowした.これは、Trk 缝子をIntroduced したD458trk cells がリガンドであるN The addition of GF indicates differentiation and cell death, and the result is different. The P75NTR Mouse Monoclonal antibody was obtained and immunohistostaining was performed. D425 RA-treated cells showed negative results, D458 RA-treated cells showed negative results after 3 days of early treatment, and the cells surface showed negative results.しかし, Western Blotting, immunosedimentation, P75NTR, P75NTR, の発appear, は発现quantity, のquestion, antibody autologous, バンドがidentification, められなかった.

项目成果

村垣善浩: "髄芽腫と神経栄養因子受容体"医学のあゆみ. 192巻.7号. 775-779 (2000)

Yoshihiro Muragaki：“髓母细胞瘤和神经营养因子受体”医学史第 192 卷第 775-779 期（2000 年）