着床前診断および出生前診断に関する基本的・臨床的研究:臨床応用の実施を目指して

着床前及产前诊断的基础与临床研究:以临床应用为目标

基本信息

  • 批准号:
    11770951
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.41万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
  • 财政年份:
    1999
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1999 至 2000
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

臍帯血をPBS(-)の細胞浮遊液にホルムアルデヒドを加えて固定し、Y染色体のαサテライト領域をコードするプライマーとdUTP-biotinをdNTPsに適量含むPCR反応液を作成し、cell suspension In Situ PCRにH12年度に成功した。さらにアビジンFITCを用いた間接蛍光抗体法にてシグナルを有核赤血球やリンパ球等の有核成分に認めることに成功した。次にシグナルを検出できた臍帯血を用いてFACStarでsortingを試み、なんとかSortingが可能であったが、母胎血中の胎児由来有核成分の濃度が400,000〜1,000,000の有核球中に1個しか存在しないという、極端に少ないため、妊婦の静脈血液からの分離は成功していない。磁石を用いたMACS(magnetic avtivated cell sorting)を本年度新たに試み、CD71(Tranferin-Receptor),CD36,CD34の3種類の抗体を用いてSortingを実行した。この抗体の中ではCD71が一番適していた。また検体量も少なくて済み、機械のメンテナンスに気を付ける必要はなく、いつでも簡単にSortingができ、有核赤血球の収率はFACSによるSortingに比べて更に一桁多いことが、確認された。目下MACSにてSortingを行い、全体の有核血球数に比して本当の数はどの程度なのか検体数を増やしてデータを集積している。この結果を第46回「日本不妊学会」にて発表予定で、またPrenatal diagnosisに投稿準備中です。
Umbilical blood 帯 を PBS (-) の cells floating liquid に ホ ル ム ア ル デ ヒ ド を plus え て fixed し, Y chromosome の alpha サ テ ラ イ ト field を コ ー ド す る プ ラ イ マ ー と dUTP - biotin を dNTPs に contain adequate む PCR 応 liquid を し consummate, cell suspension In Situ PCRにH12 annual に success た た. さ ら に ア ビ ジ ン FITC を with い た 蛍 indirect light antibody technique に て シ グ ナ ル を nucleated red blood cell や リ ン パ ball and so on nuclear の composition に recognize め る こ と に successful し た. Time に シ グ ナ ル を 検 out で き た umbilical blood 帯 を through い て FACStar で sorting を み, な ん と か sorting が may で あ っ た が, maternal-fetal blood の tire where origin of nuclear の component concentration が に in 400000 ~ 1000000 nuclear の ball 1 し か exist し な い と い う, less extreme に な い た め, The venous blood of the pregnant woman is て ら <s:1> separated ら successfully and て な な. Magnet を with い た MACS (magnetic avtivated cell sorting) を this year new た に み, CD71 surface (Tranferin - Receptor), CD36, CD34 antibody を の の 3 species use い て sorting を line be し た. In the <s:1> <s:1> antibody <e:1>, で が CD71が is an appropriate <s:1> て た た た. Less ま た 検 dimension も な く て 済 み, mechanical の メ ン テ ナ ン ス に 気 を pay け る necessary は な く, い つ で も Jane 単 に Sorting が で き, nucleated red blood cell の は 収 rate both FACS に よ る Sorting に than べ て に a girder い more こ と が, confirm さ れ た. Now MACS に て Sorting を い, all the nuclear の blood count に than し て の number the transgression は ど の degree な の か 検 body number を raised や し て デ ー タ を set product し て い る. The <s:1> <s:1> result を the 46th issue of the "Japanese Infertility Society" にて has issued a form confirming で and またPrenatal diagnosisに is being prepared for submission です.

项目成果

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佐山 雅昭其他文献

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