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線維柱帯ギャップ結合に及ぼすホルボールエステルの作用に関する研究

佛波酯对小梁间隙连接作用的研究

基本信息

批准号：
11771057
负责人：
相良健
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞内情報伝達に重要な働きをしているprotein kinase C(PKC)は細胞間情報伝達にも関わることが近年証明された。PKC activatorであるホルボールエステル(PMA)は,ギャップ結合構成蛋白質であるコネクシンをリン酸化させることでギャップ結合能を調節していると考えられている。本研究は線維柱帯細胞のギャップ結合に及ぼすPMAの作用を検討することを目的とした。ウシ線維柱帯細胞のギャップ結合能をDye-coupling法を用いて検討した。培養ウシ線維柱帯細胞に蛍光色素(Lucifer Yellow)を注入し、その隣接細胞へLucifer Yellowが移行するのを確認した。蛍光抗体法を用いた実験で,培養ウシ線維柱帯細胞間にコネクシン43の局在を確認した。これらによりウシ線維柱帯細胞はギャップ結合能を有していることが証明された。培養ウシ線維柱帯細胞に10nMのPMAを投与すると、時間依存性に隣接細胞へのLucifer Yellowの移行が抑制された。また濃度依存性にLucifer Yellowの移行が抑制された。またPKC inhibitorであるBisindomaleimide Iは,このPMAのギャップ結合の抑制作用を濃度依存性に阻害した。このことによりPMAはPKCを介してウシ線維柱帯細胞のギャップ結合能を調整していることが明らかになった。また培養線維柱帯細胞におけるコネクシン43のリン酸化をwestern blotting法を用いて検討した。PMAを作用させた場合,リン酸化されたコネクシン43のバンドの増強ならびにリン酸化されていないコネクシン43のバンドの減弱がみられた。これらより、ウシ線維柱帯細胞はギャップ結合により細胞間情報伝達を行っていると考えられた。またそのギャップ結合はPKCによるコネクシンのリン酸化により調節されている可能性が示唆された。

The information in the cell is very important. It is important to know that the protein kinase C (PKC) is the most important. PKC activator was used to detect protein, acid, acid, protein, acid, acid, acid The purpose of this study is to combine the effects of PMA on the combination of cell cycle and cell cycle. The Dye-coupling method can be used to determine the temperature of the column. The cells were injected with light pigments (Lucifer Yellow), and then the cells were transferred into Lucifer Yellow cells. The fluorescent antibody method was used in this method, and the culture column was used to confirm the activity of the antibody. The combination of the column and the cell can be used to make sure that the information is correct. In order to improve the performance of 10nM PMA, time-dependent cell connection is used to control the transfer of Lucifer Yellow. The degree is dependent on the Lucifer Yellow migration to suppress the temperature. The effects of PKC inhibitor on Bisindomaleimide I, PMA on inhibition and inhibition on inhibition were studied. This is the first time that you can use the combination of PMA and PKC information to make sure that you are aware of the situation. The method of acidizing western blotting is used in the method of acidification. The effects of PMA on acidizing, acidizing, acidifying, acidizing, acidizing If you want to know how to do this, you will have to do a good job. Please do so. This is an indication of the possibility of acidification in combination with PKC.