S.mutansのピルビン酸代謝(酸産生経路)調節機構の遺伝子発現レベルでの解析

基因表达水平分析变形链球菌丙酮酸代谢（产酸途径）的调控机制

• 批准号: 11771123
• 负责人: 山本 康人
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Tokyo Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771123/
• 关键词: Streptococcus mutans; Pyruvate formate-lyase; PFL activase; Pyruvate metabolism; streptococcus mutans

申請者は,種々の発酵条件下(好気,微嫌気および高度嫌気条件下各種糖類の種々濃度)におけるS.mutansのpflとactの発現状況を,好気的な実験環境下で容易に検出できるようにするため,pfl,actそれぞれとレポーター遺伝子(cat:クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ遺伝子)との融合遺伝子をS.mutansへ導入した.また,申請者はRT-PCR法を用いm-RNA転写レベルからも,直接的にpflとactの発現をモニターする実験にも着手した.種々の発酵条件下で培養したS.mutansから全RNAを分離し,5'端に特別な塩基配列(GCリピート)をテールとして含むプライマーでRT反応を行い,続いてこのテール領域を3'端側のプライマーとしてPCR反応を行い(S.mutansから全RNAを分離するときにどの様にしても極少量の染色体DNAが混入するため,染色体DNAからの増幅を避けるための方法),増幅されたPCR産物を相対的に定量解析した.上記の二つの方法によってpflとactの発現状況を解析した結果,本来PFLが酵素として機能しない好気的培養条件下(PFLはラジカル酵素であり,活性型は強い酸素感受性を示し好気的条件下では速やかに失活するため)でも,pflとact両遺伝子が共に,PFLが最も必須である高度嫌気的糖アルコール代謝条件下の発現量の40-50%も発現していることが確認された.従って,両者は,常に変化し易い口腔環境に備え,ほぼ構成的に発現している酵素である可能性が示唆された.さらに,actの転写機構についてPCR反応を応用して解析した結果,actはそのすぐ上流に存在する機能未知のact-5'orfと共に転写されている可能性があり,今後,act-5'orfの機能解析の必要性が示唆された.

Applicants は, kind of 々 の 発 leaven condition (good 気, micro too 気 お よ び height too 気 の 々 concentration) under the condition of all kinds of sugar に お け る S.m utans の PFL (persistent functional language) と act の を 発 now condition, good 気 な be で 験 environment easily に 検 out で き る よ う に す る た め, PFL (persistent functional language), act そ れ ぞ れ と レ ポ ー タ ー heritage 伝 child (cat: ク ロ ラ ム フ ェ ニ コ ー ル ア セ チ ル ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ heritage 伝) と の fusion posthumous son 伝 を S.m utans へ import し た. ま た, applicants は を rt-pcr method written in planning い m - RNA レ ベ ル か ら も, direct に PFL (persistent functional language) と act の 発 now を モ ニ タ ー す る be 験 に も to し た. Kind of 々 の 発 leaven で training under the condition of し た S.m utans か ら RNA を separation し, 5 'end に special な salt base with column (GC リ ピ ー ト) を テ ー ル と し て containing む プ ラ イ マ ー で RT anti 応 を い, 続 い て こ の テ ー を ル field 3' end side の プ ラ イ マ ー と し て PCR anti 応 を line い (S.m utans か ら RN A separation を す る と き に ど の others に し て も tiny の が chromosome DNA mixed with す る た め, chromosome DNA か ら の rights of を avoid け る た め の method), rights of さ れ を た PCR products phase of seaborne に quantitative analytic し た. Written の two つ の way に よ っ て PFL (persistent functional language) と act の 発 now situation を parsing し た as a result, the original PFL (persistent functional language) が enzyme と し て function し な い under the condition of the cultivation of good 気 (PFL (persistent functional language) は ラ ジ カ ル enzyme で あ り, strong activity type は い acid element sensitivity を shown under the condition of good し 気 で は speed や か に inactivation す る た め) で も, PFL (persistent functional language) と act that struck 伝 son が altogether に, PFL (persistent functional language) が most も must で あ る height too 気 sugar ア ル コ ー ル metabolic conditions の 発 is の 40-50% も 発 now し て い る こ と が confirm さ れ た. 従 っ て, struck は, often に - し easy に prepared え い oral environment, ほ ぼ consisting of に 発 now し て い る enzyme で あ が る possibility in stopping さ れ た. さ ら に, act の planning write mechanism に つ い て PCR anti 応 を 応 with し て parsing し た as a result, the act は そ の す ぐ upper に exist す る function unknown の act - 5 'orf と に total planning write さ れ て Youdaoplaceholder0 る possibility があ があ, in the future,act-5'orf <s:1> function analysis <e:1> necessity が indication された.

项目成果

Yamamoto,Y., et al.: "Characterization of the Streptococcus mutans pyruvate formate-lyase(PEL)-activating enzyme gene by complementary reconstitution of the in vitro PEL-reactivating system"Infection & Immunity. 68・8. 4773-4777 (2000)

Yamamoto, Y. 等人：“通过体外 PEL 重新激活系统的互补重建来表征变形链球菌丙酮酸裂解酶 (PEL) 激活酶基因”，感染与免疫 68・8。 2000)