活性酸素種による中枢神経系細胞のJNK,p38MAPK情報伝達活性化機構の解析

活性氧激活中枢神经系统细胞JNK和p38MAPK信号转导机制分析

• 批准号: 11771144
• 负责人: 田中 康一
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771144/
• 关键词: 過酸化水素; チミジン取り込み; アストロサイト; DNA障害; 活性酸素種; JNK; SAPK; p38 MAPK; ウエスタンブロット

本研究は脳虚血・再灌流障害や老化過程に関与すると考えられるラジカル反応性の高い活性酸素種の作用メカニズムとそれによるDNA傷害からの修復機構を解明することを目的としている。これまでに、培養神経細胞とアストロサイトを過酸化水素(H_2O_2)で処置すると、DNAの断片化に代表されるDNA傷害を引き起こしながらそれぞれの細胞死が異なった時間及び濃度依存性を示すこと、H_2O_2は神経細胞ではなくアストロサイトにおいて、ウリジシではなくチミジンの取り込みを促進し、細胞外液と細胞内Ca^<2+>貯蔵部位からのCa^<2+>の細胞質への流入に依存すること、さらに、チロシンキナーゼやp38 MAPK情報伝達系も影響を及ぼすことを明らかにしてきた。そこで本研究の2年目は、p38 MAPK情報伝達系の下流域にあたる転写因子の活性化をリン酸化を指標にし、また、遺伝子発現の可能性をディファレンシャル・ディスプレイ法により検討した。アストロサイトのH_2O_2による処置は短時間においては転写因子ATF-IIを活性化した。p38 MAPK阻害薬はこのリン酸化を抑制した。前年度の研究よりp38 MAPK阻害薬はH_2O_2によるチミジン取り込みと細胞死を抑制したことより、p38 MAPKの活性化とそれにより活性化される転写因子ATF-IIの活性化は、H_2O_2によるチミジン取り込みと細胞死に関与することが明らかになった。また、H_2O_2によるアストロサイトにおける障害や回復に関与する可能性のある蛋白質発現をディファレンシャル・ディスプレイ法により遺伝子レベルで検討したところ、いくつかの差異遺伝子を検出した。これらの差異遺伝子が発現量に差があるmRNAに由来するのかを今後、確認するとともに、これらの遺伝子がどのような役割を果たしているのかについて、シーケンシングやノーザンブロットなどを行い検討することとしている。

这项研究旨在阐明高度根治性活性活性氧的作用机理，这些氧被认为与脑缺血，再灌注损伤和衰老过程有关，以及从DNA损伤中修复的机理。到目前为止，已经揭示了用过氧化氢处理培养的神经元和星形胶质细胞（H_2O_2）时，每个细胞死亡的时间和浓度依赖性都不同，同时引起DNA损伤（例如DNA损伤），例如H_2O_2，H_2O_2促进了胸腺素的影响，而不是在尿素中的流动效果，而不是eRids <Actoty <ca^extrocy <Actoty <ca^extrocy <ca^evers <ca^extrocy exter extery <ca^evers <ca^exter exter e。细胞外流体和细胞内Ca^<2+>存储位点进入细胞质，酪氨酸激酶和p38 MAPK信号系统也具有效果。因此，在这项研究的第二年中，使用磷酸化来确定转录因子的激活，后者属于p38 MAPK信号系统，并使用差分显示方法检查了基因表达的可能性。用H_2O_2处理星形胶质细胞会在短时间内激活转录因子ATF-II。 p38 MAPK抑制剂抑制了这种磷酸化。上一年的一项研究表明，p38 MAPK抑制剂抑制了H_2O_2抑制胸苷的摄取和细胞死亡，并且激活的转录因子ATF-II的激活与H_2O_2激活的转录因子ATF-II的激活参与了胸苷和细胞死亡。此外，当使用鉴别显示方法在基因水平检查了可能参与由H_2O_2引起的星形胶质细胞损伤和恢复的蛋白质的表达时，检测到了几种差异基因。将来，我们将检查这些差异基因是否来自具有不同表达水平的mRNA，我们还将通过测序和北面印迹来考虑这些基因的作用。

项目成果

田中康一: "ラット培養アストロサイトにおける過酸化水素によるチミジン取り込みとp38 MAPKの活性化"日本薬理学会 第52回西南部会プログラム要旨. 38 (1999)

Koichi Tanaka：“培养的大鼠星形胶质细胞中过氧化氢对胸苷的摄取和 p38 MAPK 的激活”第 52 届日本药理学会西南会议的程序摘要 38 (1999)。

田中康一: "ラット培養アストロサイトにおける過酸化水素によるチミジン取り込みに対する過剰カルシウム流入の影響"第53回 日本薬理学会西南部会 プログラム・口演要旨集日本薬理学雑誌. 117(3). 69 (2001)

Koichi Tanaka：“过量钙流入对培养的大鼠星形胶质细胞中过氧化氢诱导的胸苷摄取的影响”第 53 届日本药理学会西南会议计划和口腔摘要日本药理学杂志 117(3)。

田中康一: "ラット培養アストロサイトにおける過酸化水素によるチミジン取り込みとp38 MAPKの活性化"社団法人 日本薬理学会 第52回西南部会プログラム要旨 日本薬理学雑誌. 38 (1999)

Koichi Tanaka：“培养的大鼠星形胶质细胞中过氧化氢对胸苷的摄取和 p38 MAPK 的激活”日本药理学会第 52 届西南会议计划摘要日本药理学杂志 38 (1999)。

田中康一: "ラット培養アストロサイトにおける過酸化水素によるチミジン取り込みとp38 MAPKの活性化"社団法人 日本薬理学会 第52回西南部会プログラム要旨 日本薬理学雑誌. 115(3). 72 (2000)

Koichi Tanaka：“培养的大鼠星形胶质细胞中过氧化氢对胸苷的摄取和激活”日本药理学会第 52 届西南会议计划摘要日本药理学杂志 115(3)。

田中康一: "ラット培養アストロサイトにおける過酸化水素によるチミジン取り込みと細胞死に対するCa^<2+>/カルモジュリン依存性プロティンキナーゼIIの関与"歯科基礎医学会雑誌 第41回歯科基礎医学会抄録集. 41・5・Sup.. 98(412) (1999)

Koichi Tanaka：“Ca^2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶 II 在过氧化氢诱导的胸苷摄取和培养的大鼠星形胶质细胞中的细胞死亡中的参与”基础牙科学会杂志，第 41 届基础牙科学会摘要牙科医学 41・5・Sup.. 98(412) (1999)