転写抑制因子IκB-αによるシェーグレン症候群の遺伝子治療に関する基礎的研究

利用转录抑制因子IκB-α治疗干燥综合征的基因治疗基础研究

• 批准号: 11771278
• 负责人: 玉谷 哲也
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771278/
• 关键词: NF-κB; MMP-9; IκB-α; TNF-α; シェーグレン症候群; lκB-α; 唾液腺腺房細胞

シェーグレン症候群は口腔乾燥などを主徴候とする自己免疫疾患であり、病態は腺房細胞の選択的破壊による唾液分泌能の低下であると言える。本疾患の病因論は明らかにされていないが、唾液腺組織でのTNF-αやIL-1βなどのサイトカインの発現と本疾患との間に緊密な関連性があることが報告されている。我々はサイトカインによって腺房細胞の蛋白分解酵素活性が誘導され、腺房構造の維持に極めて重要である基底膜の破壊、腺房構造の消失を惹起するとゆう発症の作業仮説を考えている。本研究は、サイトカインシグナル伝達経路において重要な役割を担っているNF-κBに注目し、その抑制因子であるIκB-αを標的分子として遺伝子導入実験を行った。また、導入したIκB-αがサイトカインによる蛋白分解酵素活性の誘導の抑制に有効であるか否か解析した。当教室にて樹立した不死化唾液腺腺房細胞株(NS-SV-AC)を用い、変異型IκB-α(srIκB-α)を導入したNS-SV-AC細胞を樹立した(srIκB-α発現細胞ではsrIκB-αが分解されずNF-κB活性が抑制される)。srIκB-α cDNA発現細胞でTNF-αによる蛋白分解酵素(MMPs)とその抑制因子(TIMPs)の誘導を、Zymography,Western blotとRT-PCRにより解析し、コントロール細胞との反応性の相違を検討した。結果、MMP-9のみに反応性に相違が認められ、TNF-αによるMMP-9の誘導はコントロール細胞のみに認められた。また、MMP-9プロモーターを用いたCAT assayを行い、MMP-9の誘導が直接NF-κBを介したシグナルであることを明らかにした。本研究により、唾液腺腺房細胞においてNF-κBの抑制がTNF-αによるMMP-9の発現を抑制することを明らかにし、NF-κBとIκB-αが治療の標的分子になりえる可能性を示した。

Serotonin syndrome, xerostomia, main symptoms, autoimmune disease, and so on , The selection of diseased gland cells is caused by the destruction of salivary secretion ability and the reduction of salivary secretion ability. The etiology of this disease is as follows: TNF-α and IL-1β in salivary gland tissue There is a close relationship between the disease and the disease, and the disease is closely related to the disease. We are responsible for the induction of proteolytic enzyme activity in glandular cells and the maintenance of glandular structure. The main reason is the destruction of the basement membrane and the disappearance of the glandular structure, which causes the disease. In this study, it is important to use NF-κB The target molecule IκB-α of the inhibitory factor IκB-α was introduced into the system.また、Introduction of IκB-αがサイトカインによるProteolytic enzyme activity induction and inhibition of effective and effective analysis of IκB-α. When the classroom was established, the immortalized salivary gland cell line (NS-SV-AC) was used and the heterotypic IκB-α (srIκB-α) was introduced. NS-SV-AC cells are established and established (srIκB-α is present in cells and srIκB-α is decomposed and NF-κB activity is inhibited). srIκB-α cDNA appears in cells and is induced by TNF-α proteolytic enzymes (MMPs) and inhibitors of proteases (TIMPs), Zymography, Western The analysis of blot and RT-PCR, and the analysis of RT-PCR cells and the resistance of RT-PCR were carried out. As a result, the resistance of MMP-9 was reversed and the TNF-α was induced by MMP-9.また、MMP-9 プロモーターを Use いたCAT The assay is performed and MMP-9 is induced by direct NF-κB induction. In this study, TNF-α was inhibited by NF-κB and MMP-9 was detected in salivary gland cells. The possibility of inhibiting NF-κB and NF-κB and IκB-α target molecules is shown.

项目成果

Masayuki Azuma: "Suppression of tumor necrosis factor a-induced matrix metalloproteinase 9 production by the introduction of a super-repressor form of inhibitor of nuclear factor κB-α complementary DNA into immortalized human salivary gland acinar cells"A

Masayuki Azuma：“通过将核因子 κB-α 互补 DNA 抑制剂的超级抑制形式引入永生化人唾液腺腺泡细胞中，抑制肿瘤坏死因子 a 诱导的基质金属蛋白酶 9 的产生”A