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P.gingivalisのペプチドグリカンを応用した歯周病診断法の開発

利用牙龈卟啉单胞菌肽聚糖诊断牙周病的方法的开发

基本信息

批准号：
11771340
负责人：
安細敏弘
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771340/
关键词：
ペプチドグリカン歯周病 P.gingivalis cell division

项目摘要

ペプチドグリカンは細菌の細胞壁の基礎構造をなす独特な化学組成と分子構造をもったヘテロポリマーであり、細菌の生命の維持に深く関わっていることが知られている。我々はPorphyromonas gingivalis(以下P.g)のペプチドグリカン合成過程に重要な酵素の一つであるmurC遺伝子の構造と機能を明らかにした。この領域は大腸菌におけるmra領域(murein synthesis cluster a)に相当することが明らかになった。現在までにP.gのmurC遺伝子の下流に存在する遺伝子のクローニングを行い、3つのORFがそれぞれ大腸菌のFtsQ、FtsAおよびFtsZに対して高いホモロジー(16%,33%,54%)を示すことがわかった。また大腸菌FtsAでは、5つの保存モチーフを持つことが知られているが、P.gFtsAにおいても、同様のモチーフを確認することができた。さらにP.gFtsAについて性質を調べたところ、大腸菌においてP.gFtsA遺伝子を過剰発現させると、filamentationを起こし、cell growthが阻害されることが位相差顕微鏡レベルで観察された。さらにP.gFtsZは、他菌種FtsZと同様にGTPase活性を有するが、以下の点でユニークな性質を示すことがわかった。すなわち、1)GTPase活性がNa^+やK^+によって活性が阻害されること、2)Mg^<2+>非存在下でも活性を有すること、およびEDTAによって活性が阻害されないことが明らかとなった。また、P.gFtsZのC末端deletion mutantを作製して、大腸菌におけるfilamentationの変化を観察したところ、C末端から177アミノ酸をdeletionしたmutantでは、filamentationがみられなくなることからT281からE330の間にP.gFtsZの機能に重要な領域が存在することが示唆された。現在、site-directed mutagenesis法を用いて当該領域におけるアミノ酸の同定を行っている。

The basic structure of the bacterial cell wall is unique, and the molecular structure is deeply related to the maintenance of bacterial life. The structure and function of Porphyromonas genivalis (P. g), an important enzyme in the synthesis process, are clearly defined. This domain is called mra domain (murein synthesis cluster a). The presence of murC gene downstream of P.g. and 3 ORFs containing FtsQ, FtsA, and FtsZ of E. coli was also detected (16%, 33%, 54%). E. coli FtsA, P. gtsA P. gFtsA gene expression, filamentation, cell growth inhibition, phase contrast, microscopical observation P. gFtsZ has the same GTase activity as FtsZ, and the following properties are shown. 1) GTase activity is inhibited by Na^+ or K^+; 2) GTase activity is inhibited by EDTA in the absence of Mg ^+; The C-terminal deletion mutant of P.gFtsZ is controlled by E. coli, and the transformation of the C-terminal deletion mutant is detected. The transformation of the C-terminal deletion mutant is detected by T281 and E330, and the important functional areas of P.gFtsZ are indicated. Now, site-directed mutagenesis method is used when the field is in the same state.