EOP患者由来好中球におけるDGKの塩基配列の多型性と好中球機能低下の関わり

EOP患者中性粒细胞DGK核苷酸序列多态性与中性粒细胞功能下降的关系

• 批准号: 11771359
• 负责人: 前田 博史
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771359/
• 关键词: DGK; 早期発症型歯周炎; 遺伝子発現; 発現調節; diacylglycerol kinase; 遺伝子多型性; 遺伝子構造

1.好中球走化能とDGK遺伝子発現量好中球走化能の低下がみられる早期発症型歯周炎患者(EOP)と健常者のDGK遺伝子発現量をNorthern blot法によって調べた。すなわち、走化性因子FMLP(N-formylmethionylleucylphenylalanine)で刺激した好中球、ならびに無刺激の好中球から全RNAを抽出して、DGK遺伝子プローブとのハイブリダイゼーション反応に供した。ハイブリダイゼーションシグナルの強さはオートラジオグラフィー後、NIH Imageで数値化した。内部コントロールにはβ-actinを用いDGK/β-actinをDGK発現量として評価した。無刺激の条件下では、EOP患者のDGK遺伝子発現量は健常者の発現量と有意な差は認められなかった。ところが、FMLP刺激下においてはEOP患者のDGK遺伝子発現は低下する傾向がみられた。つぎに、DGK遺伝子は異なる2つの転写開始点をもつことが明らかとなっているが、FMLP刺激によって、2つの開始点からの転写産物に量的変化が起こるかどうかをRT-PCR法によって調べた。結果、新しく見つかった転写開始点からのmRNA量はFMLP刺激後に若干の増加を示した。2.総括DGKの酵素活性の低下がEOP患者で報告されているが、この低下の原因はこれまで明らかにされていない。今回の研究ではDGKの構造をcDNAの塩基配列から、発現量をmRNA量から調べ、EOP患者のDGK酵素活性の低下を分子レベルで捉えようとした。結果、EOP患者において、DGKの構造上の変化は認められず、DGK遺伝子の発現量の低下がみられた。EOP患者のDGK酵素活性の低下はDGK遺伝子の発現調節に起因する可能性が示された。2つの転写開始点(プロモーター領域)がどのようにDGK遺伝子の発現調節に関与しているかは今後の課題である。

1. Northern blot analysis of DGK gene expression in patients with early-onset periodontitis (EOP) and healthy individuals. The chemical factor FMLP(N-formylmethylleucylphenylalanine) can stimulate and stimulate the whole RNA of the human body, and DGK gene can stimulate the whole RNA of the human body. The NIH Image is a digital image. DGK/β-actin is the most important component of DGK. DGK gene expression in EOP patients without stimulation was significantly higher than that in healthy patients. DGK gene expression tends to decrease in EOP patients under FMLP stimulation. The change of the amount of the written product from the start point of FMLP stimulation to the start point of RT-PCR method. The results showed that the mRNA level increased after FMLP stimulation. 2. The decrease of enzyme activity of DGK was reported in EOP patients, and the reasons for the decrease were also reported in EOP patients. The present study reveals that the structure of DGK, cDNA sequence, mRNA expression, and molecular level of DGK enzyme activity in EOP patients are lower than those in control group. The results showed that EOP patients were affected, the structural changes of DGK were observed, and the occurrence of DGK gene was decreased. The possibility that decreased DGK enzyme activity in EOP patients may be responsible for the regulation of DGK gene expression is discussed. 2. The starting point of writing is to adjust the occurrence of DGK gene and the future problems.

项目成果

H. NASSAR: "Characterization of diacylglycerol kinase gene in neutrophils"Journal of Dental Research. 78(Special issue). 353 (1999)

H. NASSAR：“中性粒细胞中二酰甘油激酶基因的表征”牙科研究杂志。

Oyaizu K,Maeda H et al.: "Identification of diacylglycerol kinase isoforms in neutrophils from LJP patients"Jornal of Dental Research. 79. 230-230 (2000)

Oyaizu K、Maeda H 等人：“LJP 患者中性粒细胞中二酰甘油激酶亚型的鉴定”《牙科研究杂志》。

K. SAWADA: "Identification by Subtractive Hybridization of a Novel Insertion Sequence Specific for Virulent Strain of Porphyromonas gingivalis"Infection AND Immunity. 67(11). 5621-5625 (1999)

K. SAWADA：“通过消减杂交鉴定针对牙龈卟啉单胞菌毒力菌株的新型插入序列”感染和免疫。

前田 博史: "Diacylglycerol kinase-α遺伝子の構造解析"日本歯周病学会誌. 41(春季特別号). 138 (1999)

Hiroshi Maeda：“二酰甘油激酶-α 基因的结构分析”日本牙周病学会杂志 41（春季特刊）138（1999 年）。

錦城 哲二: "細菌16SリボゾームRNA遺伝子を用いた歯周病細菌の同定"日本歯科保存学雑誌. 42(6). 1108-1115 (1999)

Tetsuji Kinjo：“利用细菌 16S 核糖体 RNA 基因鉴定牙周病细菌”，日本保守牙科杂志 42(6) 1108-1115 (1999)。