魚臭症候群の原因となるフラビン含有モノオキシゲナーゼ遺伝子の解析

引起鱼臭综合征的含黄素单加氧酶基因分析

• 批准号: 09877427
• 负责人: 鎌滝 哲也
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877427/
• 关键词: 遺伝病; ノックアウトマウス; トリメチルアミン; クローニング; 代謝欠損; 発現系; 遺伝子治療; 遺伝子多型

1. ヒト肝ミクロゾーム用いた速度論的解析の結果、トリメチルアミン(TMA)のN-酸化酵素活性は一相性を示し、Km値は46μMであった。熱処理(FMOは熱に不安定)あるいはFMOの阻害薬の添加によりTMAのN-酸化酵素活性は大きく低下した。これらの結果より、ヒト肝臓におけるTMAのN-酸化はFMOによって触媒されていることが示唆された。2. ヒト肝よりRNAを調製し、RT-PCRにより、ヒトFMO3およびFMO5のcDNAを単離した。同様にして、ヒト腎臓RNAからFMO1cDNAを単離した。得られたcDNAを大腸菌発現ベクターpTrc99Aに組み込み、大腸菌JM105に導入して発現系を構築した。大腸菌で発現させたヒトFMO各分子種は、FMOの典型的な基質であるメチマゾールのS-酸化酵素活性を有していた。したがって、ヒトFMO各分子種の大腸菌での発現に成功したことが示された。3. 大腸菌に発現させたヒトFMOを用いてTMAのN-酸化酵素活性を測定した結果、FMO1およびFMO3がTMAのN-酸化に対する触媒活性を有することを見いだした。さらに、FMO1とFMO3について、速度論的パラメータを算出した結果、Vmax/Km値で比較すると、FMO3の値がFMO1の値の約110倍であった。したがって、ヒトFMO分子種の中でTMAのN-酸化への寄与が最も大きいのはFMO3であることが明らかとなった。成人の肝臓ではFMO3の発現量が最も多くFMO1はほとんど発現していないので、実際のヒトの肝臓ではFMO3のみがTMAの代謝を担っていると考えられる。

1. Analytical results of ヒトganミクロゾーム using いた velocity theory, トリメチルアミン(T The activity of MA) N-acidifying enzyme is shown in one phase and the Km value is 46μM. Heat treatment (FMO is hot and unstable) is the reason why FMO's inhibitory effect is added and the N-acidifying enzyme activity of TMA is reduced. The result of これらのより、ヒトgangyi におけるTMAのN-acidified はFMO によってcatalyst されていることがshows 唆された. 2. ヒトLiver RNA modulation, RT-PCR により, ヒトFMO3 およびFMO5 のcDNA を単leave. Same as 様にして, ヒトKidney 蓓RNA からFMO1cDNA を単里した. The cDNA of Escherichia coli was introduced into the pTrc99A group, and the Escherichia coli JM105 was introduced and constructed. The various molecular species of coliform FMO are present, and the typical matrix of FMO is the active S-acidifying enzyme. The coliform bacteria of various molecular species such as したがって and ヒトFMO are now successful. 3. Escherichia coli is now tested for FMO and the N-acidifying enzyme activity of TMA is measured. Results, F MO1およびFMO3がTMAのN-acidified catalyst active することを见いだした.さらに、FMO1とFMO3について、The speed theory's calculation results and Vm The ax/Km value is about 110 times that of FMO3 and FMO1.したがって, ヒトFMO molecular species の中でTMAのN-acidified への发 and がmost も大きいのはFMO3 であることが明らかとなった. Adult's liver is full of bloodで、実记のヒトの liver臓ではFMO3のみがTMAのmetabolismを聣ていると考えられる.

项目成果

K.Fujita, T.Kamataki et al.: "Establishment of a salmonella tester strain highly sensitive to mutagenic heterocyclic amines" Cancer Res.58. 1833-1838 (1998)

K.Fujita、T.Kamataki 等人：“建立对诱变杂环胺高度敏感的沙门氏菌测试菌株”Cancer Res.58。

K.Nunoya et al.: "A new deleted allele in human cytochrome P4502A6(CYP2A6)gene found in human liver subjects showing poor metabolic capacity to coumarin and (+)-cis-3,5-dimethyl-2-(3-pyridyl)thiazolidin-4-one hydrochloride(SM-12502)." Pharmacogenetics. (i

K.Nunoya 等人：“在人类肝脏受试者中发现了人类细胞色素 P4502A6(CYP2A6) 基因中的一个新删除等位基因，该等位基因对香豆素和 ( )-cis-3,5-二甲基-2-(3-吡啶基) 的代谢能力较差

K.Fujita, T.Kamataki et al.: "In vivo detection of mutation induced by aflatoxin B_1 using human CYP3A7/HITEC hybrid mice." Biochem.Biophys.Res.Commun.250. 150-153 (1998)

K.Fujita、T.Kamataki 等人：“使用人 CYP3A7/HITEC 杂交小鼠体内检测黄曲霉毒素 B_1 诱导的突变。”

A.Kubo et al.: "Determination of FAD-binding domain in flavin-containing monooxygenase 1(FMO1)." Arch.Biochem.Biophys.345. 271-277 (1997)

A.Kubo 等人：“含黄素单加氧酶 1 (FMO1) 中 FAD 结合域的测定”。

Y.Li et al.: "in vivo activation of aflotoxin B1 in C57BL/6N mice carrying a human fetus-specific CYP3A7 gene." Cancer Res.57. 641-645 (1997)

Y.Li 等人：“携带人类胎儿特异性 CYP3A7 基因的 C57BL/6N 小鼠体内黄曲霉毒素 B1 的激活。”