虚血性神経細胞死の発現機序と内因性神経保護物質の検索に関する研究

缺血性神经元死亡机制研究及寻找内源性神经保护物质

• 批准号: 11771462
• 负责人: 田村 豊
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Fukuyama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771462/
• 关键词: A1 receptor; A2 receptor; adenosine; cortex; culture; glutamte; hypoglycemia; hypoxia; cortical neuron; glutamate

【研究実施概要】本年度は、昨年度に確立した虚血性神経細胞死のin vitro実験系を用いて神経細胞死の機序およびアデノシンの神経保護作用機序の検討を行った。【実験成績】(1)細胞の形態観察および核染色の結果より低酸素・低グルコース処置により誘発される神経細胞死は一部はアポトーシス様の神経細胞死であるが、主としてネクローシス様の神経細胞死であることが示唆された。(2)低酸素・低グルコース処置により誘発される神経細胞死はprotein kinase C(PKC)阻害薬のH-7およびCaM kinase II阻害薬のKN-62により有意に抑制された。(3)低酸素・低グルコース処置により誘発される神経細胞死はアデノシンA1受容体拮抗薬のCPTおよびA2受容体拮抗薬のKF-17114のどちらによっても増悪された。(3)Fura-2を用いて細胞内カルシウム濃度を測定した結果、アデノシンA1受容体作動薬のCHAは低酸素・低グルコース処置による細胞内カルシウム濃度の上昇を有意に抑制した。一方、A2受容体作動薬のCGS-21680はカルシウム濃度上昇を抑制しなかった。(3)アデノシンの神経保護作用はcyclic AMP依存性蛋白リン酸化酵素(PKA)の阻害薬であるH-89により有意に減弱された。(4)低酸素・低グルコース処置により培地中のアデノシン含量は処置時間に依存して上昇した。【考察】虚血性神経細胞死は、虚血中に過剰遊離される興奮性アミノ酸のより惹起されるネクローシス様の神経細胞死であり、PKCの活性化、CaMKIIの活性化など、細胞内カルシウム濃度の上昇により活性化される細胞内反応が亢進していると推測される。一方、虚血状態においては、神経細胞からアデノシンが遊離され神経保護的に働いていると推測される。アデノシンはA1受容体を介するグルタミン酸遊離抑制作用と、A2受容体を介するPKAの活性化を伴う2つの作用機序を有しており、中枢神経系において虚血性の神経細胞死に対する内因性の神経保護因子として働いていることが示唆された。

[Summary of Research] This year, we established the mechanism of neuroprotection in vitro of the human blood cell death in vitro and studied the mechanism of neuroprotection in vitro of human blood cell death in vitro. [Results](1) Morphological observation of cells and results of nuclear staining: hypothyroidism, hypothyroidism, treatment, induction of neuronal cell death, partial loss of neuronal cell death, primary loss of neuronal cell death, primary loss of neuronal cell death, and induction of neuronal cell death. (2)The protein kinase C(PKC) inhibitor H-7 and the CaM kinase II inhibitor KN-62 are intentionally inhibited by the low-and low-level protein pathway. (3)Low acid, low protein, low (3)Fura-2 was used to determine the intracellular cell concentration, and the increase of intracellular cell concentration was intentionally suppressed by the action of CHA on A1 receptor. CGS-21680, a receptor activator, inhibits the increase in concentration of the receptor. (3)The neuroprotective effect of the enzyme is intentionally attenuated by the inhibitor H-89 of cyclic AMP-dependent protein kinase (PKA). (4)The content of vitamin C in the medium depends on the treatment time. [Investigation] Hypoxic neuronal cell death, excessive dissociation in the hypoglycemic medium, excitation of excitatory acid, activation of PKC, activation of CaMKII, increase of intracellular concentration of CaMKII, and increase of intracellular activity are presumed to be the causes of neuronal cell death, activation of PKC, and activation of CaMKII. In the absence of blood supply, the neurocyte is free from the neuroprotective medium. The mechanism of action of PKA activation mediated by A1 receptor and A2 receptor is related to endogenous neuroprotective factors in the central nervous system.