カチオン性薬物の消化管吸収機構の解明:輸送担体介在輸送の実証と遺伝子クローニング

阐明阳离子药物的胃肠道吸收机制：载体介导的转运和基因克隆的演示

• 批准号: 11771469
• 负责人: 桂 敏也
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771469/
• 关键词: 消化管吸収; 分泌; Caco-2; トランスポータ; H^+; 三級アミン逆輸送体; 小腸刷子縁膜; 三級アミン輸送体

カチオン性薬物の多くは、生理的pH条件において解離型として存在するにも関わらず、経口投与後良好に吸収されることが知られているが、その機構については未だ不明な点が数多く残されていた。本研究ではすでに前年度、ヒト消化管モデルとして繁用されている培養腸上皮細胞Caco-2を用い、カチオン性薬物ジフェンヒドラミンの輸送機構について検討を行い、N,N-ジメチルもしくはN,N-ジエチル構造を特異的に認識する新規三級アミン輸送体の存在することを明らかにした。引き続き本年度は、この三級アミン輸送体の駆動力を明らかにする目的で、三級アミンであるプロカインアミドの単離家兎小腸刷子縁膜小胞への取り込み特性について検討を行った。刷子縁膜小胞によるプロカインアミドの取り込みは、小胞内pHを6.0、小胞外pHを7.5とし外向きのH^+勾配を与えた場合に顕著に促進され、一時的な昇り坂輸送が観察された。この促進効果はプロトノフォアの共存により阻害されたことから、プロカインアミドはH^+と逆輸送されていることが示された。さらに、種々化合物を用いた阻害効果・カウンタートランスポート効果の検討から、Caco-2細胞の場合と同様にN,N-ジメチルもしくはN,N-ジエチル構造を有する三級アミン化合物を特異的に認識する、新規H^+/三級アミン逆輸送体の存在することを明らかにした。Caco-2細胞より単離したmRNAをアフリカツメガエル卵母細胞に注入してタンパクを発現させ、プロカインアミドの取り込みを測定したところ、コントロールの卵母細胞に比べて取り込みが顕著に促進した。今後、本発現系を用いた発現クローニングの手法により、新規H^+/三級アミン逆輸送体のcDNAクローニングを進め、カチオン性薬物の吸収に関わる輸送体の分子機構について解明する予定である。

カ チ オ ン sex 薬 content more than の く は, physiological conditions of pH に お い て dissociation type と し て exist す る に も masato わ ら ず, 経 mouth after cast with good に 収 さ れ る こ と が know ら れ て い る が, そ の institutions に つ い て は not unknown だ な point が more く residual さ れ て い た. Year, before this study で は す で に ヒ ト digestive tube モ デ ル と し て numerous use さ れ て い る optimization training intestinal epithelial cells Caco - 2 を い, カ チ オ ン sex 薬 content ジ フ ェ ン ヒ ド ラ ミ ン の transportation agency に つ い て 検 for line を い, N, N - ジ メ チ ル も し く は N, N - ジ エ チ ル tectonic を specific に know す る new rules on level 3 ア ミ ン conveying の There exists する とを とを, ら に, に, た. Lead き 続 き は this year, こ の tertiary ア ミ ン conveying body の 駆 power を Ming ら か に す で る purpose, triple ア ミ ン で あ る プ ロ カ イ ン ア ミ ド の 単 兎 home small bowel brush try vesicular へ の take り 込 み features に つ い て 検 line for を っ た. Brush try small cell membrane に よ る プ ロ カ イ ン ア ミ ド の take り 込 み は, small intracellular pH を 6.0, small extracellular pH 7.5 と を し outgoing き の H ^ + hook を and え た occasions に 顕 に advancement さ れ, a temporary な り sakaguchi conveying が 観 examine さ れ た. こ の promote unseen fruit は プ ロ ト ノ フ ォ ア の coexistence に よ り resistance against さ れ た こ と か ら, プ ロ カ イ ン ア ミ ド は H ^ + と inverse conveying さ れ て い る こ と が shown さ れ た. さ ら に, kinds of compounds 々 を い た resistance against unseen mortensen カ ウ ン タ ー ト ラ ン ス ポ ー ト unseen fruit の 検 please か ら optimization, Caco - 2 cells と の occasions with others に N, N - ジ メ チ ル も し く は N, N - ジ エ チ ル a す を construction る tertiary ア ミ ン compound を specific に know す る, new rules H ^ + / 3 ア ミ ン inverse transport body exist の す る こ と を Ming ら に に た. Caco - 2 cells よ り 単 from し た mRNA を ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル oocytes に injection し て タ ン パ ク を 発 now さ せ, プ ロ カ イ ン ア ミ ド の take り 込 み を determination し た と こ ろ, コ ン ト ロ ー ル の oocytes に than べ て take り 込 み が 顕 に advancement し た. In the future, this 発 now is を い た 発 now ク ロ ー ニ ン グ の gimmick に よ り, new rules H ^ + / 3 ア ミ ン inverse transport body の cDNA ク ロ ー ニ ン グ を め, カ チ オ ン sex suction 収 薬 content の に masato わ る conveying body の molecular institutions に つ い て interpret す る designated で あ る.

项目成果

Hideyuki Motohashi et al.: "Effects of tacrolimus and cyclosporin A on peptide transporter PEPT1 in Caco-2 cells"Pharmaceutical Research. 18巻・5号(掲載予定). (2001)

Hideyuki Motohashi 等人：“他克莫司和环孢菌素 A 对 Caco-2 细胞中肽转运蛋白 PEPT1 的影响”，Pharmaceutical Research 第 18 卷，第 5 期（待出版）。

Yumiko Matsuo et al.: "Transport of levofloxacin in the OK kidney epithelial cell line : Interaction with p-aminohippurate transport"Pharmaceutical Research. 18巻・4号(掲載予定). (2001)

Yumiko Matsuo 等人：“左氧氟沙星在 OK 肾上皮细胞系中的转运：与 p-氨基马尿酸转运的相互作用”，药物研究，第 18 卷，第 4 期（待出版）。

Hiroshi Mizuuchi et al.: "Transepithelial transport of diphenhydramine across monolayers of the human intestinal epithelial cell line Caco-2"Pharmaceutical Research. 17巻・5号. 539-545 (2000)

Hiroshi Mizuuchi 等人：“苯海拉明跨人肠上皮细胞系 Caco-2 单层的跨上皮转运”药物研究，第 17 卷，第 5 期。539-545 (2000)

Hiroshi Mizuuchi et al.: "Diphenhydramine transport by pH-dependent tertiary amine transport system in Caco-2 cells"American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 278巻・4号. G563-G569 (2000)

Hiroshi Mizuuchi 等人：“Caco-2 细胞中 pH 依赖性叔胺转运系统的苯海拉明转运”美国生理学杂志 - 胃肠道和肝脏生理学第 278 卷，第 4 期。G563-G569 (2000)

Hiroshi Mizuuchi et al.: "Transepithelial transport of diphenhydramine across monolayers of the human intestinal epithelial cell line Caco-2"Pharmaceutical Research. 17巻・5号. 掲載予定 (2000)

Hiroshi Mizuuchi 等人：“苯海拉明跨人肠上皮细胞系 Caco-2 单层的跨上皮转运”，药物研究，第 17 卷，第 5 期。计划出版（2000 年）