極性上皮細胞における有機イオントランスポータの細胞膜局在化機構の解明

阐明极化上皮细胞中有机离子转运蛋白的膜定位机制

• 批准号: 15790093
• 负责人: 桂 敏也
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790093/
• 关键词: 極性上皮細胞; ペプチドトランスポータ; 蛋白質間相互作用; PDZドメイン; 細胞膜ターゲティング; 膜輸送; 有機アニオントランスポータ

小腸や腎臓などの極性上皮細胞では、血管側側底膜と管腔側刷子縁膜に機能特性の異なる有機イオントランスポータが局在し、薬物輸送の方向性(吸収・分泌)の決定に重要な役割を果たしている。しかし、これら有機イオントランスポータの細胞膜局在化機構については未だ不明な点が多い。本研究では、薬物トランスポータとしてペプチドトランスポータ(PEPT1)を選択し、蛍光蛋白質(EGFP)との融合蛋白質として極性上皮細胞LLC-PK_1に安定発現させ、PEPT1の細胞膜局在化機構について検討を加えた。PEPT1のC末端側アミノ酸3残基(PDZドメインによって認識されうる配列:PDZ-interacting domain)を欠失させた場合、主にライソゾームと側底膜に局在が認められ、主に頂側膜に発現している野生型とは明らかに異なっていた。従って、PEPT1のPDZ-interacting domainが細胞膜局在に関与していることが考えられ、その機構について詳細に解析した。パルス-チェイス法と細胞表面ビオチン化により生合成後のPEPT1の細胞膜発現挙動について検討したところ、PEPT1変異体も野生型と同様に頂側膜へ輸送されるものの、頂側膜に発現後の消失が野生型に比べて速く、速やかに内在化していることが明らかとなった。以上の結果より、PEPT1のC末端側3残基を欠失させることによって、選別過程や輸送過程には影響が認められないものの、頂側膜における保持機構に影響することが示唆された。PEPT1と相互作用するPDZ蛋白質は現時点では不明であるが、PEPT1のPDZ-interacting domainを介した蛋白質相互作用によって頂側膜においてPEPT1が保持されるものと考えられる。

Functional characteristics of the polar epithelial cells of the small intestine and kidneys, the basement membrane of the blood vessel side and the brush membrane of the luminal side It is important to determine the directionality (absorption/secretion) of drug delivery as a result of the drug delivery process.しかし, これらorganic イオントランスポータのcell membrane localization mechanism については无だUnknown な点が多い. This study is based on the results of this study: the selection of では, 薬物トランスポータとしてペプチドトランスポータ(PEPT1), and EGFP). The fusion proteins are polar epithelial cells LLC-PK_1, which is stable and stable, and PEPT1, which is a cell membrane localization mechanism. PEPT1's C-terminal side amino acid 3 residues (PDZ ドメインによって知されうるalignment: PDZ-interacting domain) When the situation is lost, the main side of the bottom film is in the situation Recognize the wild-type and main apical and lateral membranes.従って, PEPT1's PDZ-interacting domain's cell membrane bureau and していることがtest えられ, そのorganization's について's detailed analysis した.パルス-チェイス method and cell surface ビオチンによりsynthetic PEPT 1. Cell membrane irritation, PEPT1 allogeneic The raw type is the same as the apical membrane and the transport of the apical membrane, and the apical membrane appears and then disappears. The raw type is faster than the speed, and the speed is internalized. The above results indicate that the three residues on the C-terminal side of PEPT1 are missing and the selection process is carried out. The process is affected by the process and the apical membrane is maintained by the mechanism. The current point of PEPT1's interaction with PDZ protein is unknown. PEPT1's PDZ-interacting domain を mediated し た protein interaction に よ っ て top side membrane に お い て PEPT1 が maintained さ れ る も の と 考 え ら れ る.

项目成果

Decreased activity and expression of intestinal oligopeptide transporter PEPT1 in rats with hyperthyroidism in vivo

• DOI: 10.1023/b:pham.0000029285.45101.ee
• 发表时间: 2004-06-01
• 期刊: PHARMACEUTICAL RESEARCH
• 影响因子: 3.7
• 作者: Ashida, K;Katsura, T;Inui, K
• 通讯作者: Inui, K

Miyako Okamura et al.: "Inhibitory effect of zinc on PEPT1-mediated transport of glycylsarcosine and β-lactam antibiotics in human intestinal cell line Caco-2"Pharmaceutical Research. 20巻・9号. 1379-1383 (2003)

Miyako Okamura 等人：“锌对人肠道细胞系 Caco-2 中 PEPT1 介导的甘氨酰肌氨酸和 β-内酰胺抗生素转运的抑制作用”，Pharmaceutical Research，第 20 卷，第 9 期。1379-1383 (2003)

Kayoko Ashida et al.: "Decreased activity and expression of intestinal oligopeptide transporter PEPT1 in rats with hyperthyroidism in vivo"Pharmaceutical Research. 21巻(印刷中). (2004)

Kayoko Ashida 等人：“体内甲状腺机能亢进大鼠肠道寡肽转运蛋白 PEPT1 的活性和表达降低”，药物研究第 21 卷（出版中）。

Toshiya Katsura et al.: "Intestinal absorption of drugs mediated by drug transporters : mechanisms and regulation"Drug Metabolism and Pharmacokinetics. 18巻・1号. 1-15 (2003)

Toshiya Katsura 等人：“药物转运蛋白介导的药物肠道吸收：机制和调节”《药物代谢和药代动力学》第 18 卷，第 1. 1-15 期（2003 年）。