パーオキシナイトライトのシトクロムc修飾反応とミトコンドリア活性・細胞障害作用

过氧亚硝酸盐的细胞色素c修饰反应和线粒体活性/细胞毒性作用

• 批准号: 11771475
• 负责人: 中川 秀彦
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: National Institute of Radiological Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771475/
• 关键词: パーオキシナイトライト; ニトロチロシン; ミトコンドリア膜電位; ミトコンドリア酸素消費; 酸化還元反応; マススペクトロメトリー; 一酸化窒素; シトクロムc

パーオキシナイトライト処理及び一酸化窒素処理による神経芽細胞のミトコンドリア機能への障害作用を検討する目的で、ミトコンドリア膜電位の変化を測定した。ミトコンドリア膜電位の低下は神経芽細胞のアポトーシス様細胞死と関連があることが知られている。ミトコンドリア膜電位の変化は、膜電位に依存して細胞内に取り込まれる蛍光指示薬を使用し、細胞内の蛍光物質の相対強度をフローサイトメーターを利用して測定した。その結果、パーオキシナイトライト産生試薬処理及び一酸化窒素産生試薬を投与した細胞においては、対照群に比較してより多くの細胞でミトコンドリア膜電位が低下していることが示された。膜電位の低下した細胞数は、投与後の時間経過に伴って増大し、24時間後から48時間後に顕著となった。また、パーオキシナイトライトにより修飾されたシトクロムcについて基質酸化能を検討した。特にP450型基質酸化反応である脱メチル化反応について検討した。基質として7メトキシクマリンを、酸化剤として過酸化水素を用いて、パーオキシナイトライト修飾シトクロムcによる酸化反応を行ったところ、パーオキシナイトライト修飾されたシトクロムcでは基質酸化能が亢進していることが示された。またESRスピン補足法により同系での活性酸素種の生成が示唆された。未修飾のシトクロムcについてはp450型基質酸化反応を行うことが報告されていないことから、パーオキシナイトライト処理によって酸化還元性質が変化して新たな基質酸化能を獲得したことが示唆された。

パ ー オ キ シ ナ イ ト ラ イ ト 処 principle and a acidification smothering び 処 Richard に よ る god 経 bud cells の ミ ト コ ン ド リ ア function へ の handicap of role を beg す 検 る purpose で, ミ ト コ ン ド リ ア membrane potential の variations change を determination し た. ミ ト コ ン ド リ ア membrane potential low の は god 経 bud cells の ア ポ ト ー シ ス others in cell death と masato even が あ る こ と が know ら れ て い る. ミ ト コ ン ド リ ア membrane potential の - は, membrane potential に dependent し て in cells take り に 込 ま れ る 蛍 light indicator 薬 を use し, intracellular の 蛍 light material の strength seaborne を フ ロ ー サ イ ト メ ー タ ー を using し て determination し た. そ の results, パ ー オ キ シ ナ イ ト ラ イ ト produce try 薬 処 principle and a acidification smothering び element try 薬 を cast with し た cells に お い て は, according to the group of seaborne に compare し て よ り more く の cells で ミ ト コ ン ド リ ア membrane potential low が し て い る こ と が shown さ れ た. The membrane potential is <s:1> low, the number of た cells is, the <s:1> time after administration is に accompanied by って increase <s:1>, 24 time later ら ら, 48 time later に顕 となった. ま た, パ ー オ キ シ ナ イ ト ラ イ ト に よ り modified さ れ た シ ト ク ロ ム c に つ い て matrix acidizing can を beg し 検 た. Special にP450 matrix acidification reaction 応である desorption メチ oxidation reaction 応に 応に て検 て検 て検 for <s:1> た. Matrix と し て 7 メ ト キ シ ク マ リ ン を, acidification tonic と し て water element を acidification passes with い て, パ ー オ キ シ ナ イ ト ラ イ ト modified シ ト ク ロ ム c に よ る acidification anti 応 を line っ た と こ ろ, パ ー オ キ シ ナ イ ト ラ イ ト modified さ れ た シ ト ク ロ ム c で は matrix acidizing can が hyperthyroidism し て い る こ と が shown さ れ た. Youdaoplaceholder0 ESRスピ <e:1> supplementation method によ homologous で active acid species <e:1> generation が prompts された. Undecorated の シ ト ク ロ ム c に つ い て は p450 type matrix acidizing the 応 を line う こ と が report さ れ て い な い こ と か ら, パ ー オ キ シ ナ イ ト ラ イ ト 処 Richard に よ っ て acidification and yuan nature が variations change し て new た な matrix acidizing can get し を た こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

Nakagawa H.et al.: "Endogenous and New Synthetic Antioxidants for Peroxynitrite : Selective Inhibitory Effect of 5-Methoxytryptamine and Lipoic Acid on Tyrosine Nitration by Peroxynitrite"Antiox.Redox Signaling. 1. 239-244 (1999)

Nakakawa H.等人：“过氧亚硝酸盐的内源性和新型合成抗氧化剂：5-甲氧基色胺和硫辛酸对过氧亚硝酸盐酪氨酸硝化的选择性抑制作用”Antiox.Redox Signaling。

Nakagawa,H. et al.: "Scavengers for Peroxynitrite : Inhibition of Tyrosine Nitration and Oxidation with Tryptamine Derivatives, α-Lipoic Acid and Synthetic Compounds"CHEM. PHARM. BULL. 48. 261-265 (2000)

Nakakawa, H. 等人：“过氧亚硝酸盐清除剂：用色胺衍生物、α-硫辛酸和合成化合物抑制酪氨酸硝化和氧化”CHEM 48。261-265 (2000)。

Nakagawa H.et al.: "Scavengers for Peroxynitrite : Inhibition of Tyrosine Nitration and Oxidation with Tryptamine Derivatives,a-Lipoic Acid and Synthetic Compounds"Chem.Pharm.Bull.. 48. 261-265 (2000)

Nakakawa H.等：“过氧亚硝酸盐清除剂：用色胺衍生物、α-硫辛酸和合成化合物抑制酪氨酸硝化和氧化”Chem.Pharm.Bull.. 48. 261-265 (2000)

Nakagawa,H. et al.: "Induction of superoxide in glioma cell line U87 stimulated with lipopolysaccharide and interferon-gamma : ESR using a new flow-type quartz cell."FEBS Lett.. 471. 187-190 (2000)

中川，H.

Nakagawa,H. et al.: "L-Arginine dependent nitric oxide formation in mice following exposure to ionizing radiation as quantified by electron paramagnetic resonance"Nitric Oxide : Biology and Chemistry. (In press). (2001)

中川，H.