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パーオキシナイトライトによるシトクロムC修飾作用のアポトーシス様細胞死への関与

过氧亚硝酸盐对细胞色素 C 的修饰参与凋亡样细胞死亡

基本信息

批准号：
13771417
负责人：
中川秀彦
金额：
$ 1.28万
依托单位：
National Institute of Radiological Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

1.パーオキシナイトライト処理による細胞内カスパーゼ経路活性化能の検討前年度にin vitroにおけるカズパーゼ-3の活性化について免疫ブロッティング法を用いて解析し、パーオキシナイトライト処理シトクロムcではカスパーゼ-3活性化能が低下していることを見いだした。本年度は神経膠芽腫培養細胞にパーオキシナイトライトを作用させた場合のカスパーゼ-3および上流経路の活性化の有無を免疫ブロッティング法、蛍光性擬似基質の切断活性により検討した。細胞生存率はパーオキシナイトライト濃度依存的に減少したにも関わらず、持続的なパーオキシナイトライト処理によりカズパーゼ-3および-9活性化が抑制されることが示された。また、短時間のパーオキシナイトライト処理ではアポトーシスが進行することが示された。これによりin vitro系に対応する現象が培養細胞系でも観察されたことになる。2.パーオキシナイトライト処理による培養細胞内シトクロムcの修飾反応の解析前年度の検討において、パーオキシナイトライト処理によってラット神経膠芽腫培養細胞内の12〓14kDa付近の蛋白質がニトロ化されることが明らかとなった。培養細胞のパーオキシナイトライト処理によって実際に細胞内のシトクロムcがニトロ化されるか否かを免疫沈降法を用いて検討したところ、パーオキシナイトライト処理により細胞内でシトクロムcがニトロ化されることが示された。さらにin vitro系でニトロ化されたシトクロムcを加水分解し修飾部位を検討したところ、Trp59およびTyr67を含むペプチド断片に変化が観察された。3.無処理シトクロムcを添加した場合のカスパーゼ-3活性化能回復の可能性についての検討パーオキシナイトライト処理神経膠芽腫細胞から細胞抽出液を調整しシトクロムcを添加してカスパーゼ-3活性化能が回復するかを検討したが、活性化は観察されなかった。

1. パーオキシナイトライト treatment による intracellular カスパーゼ経路activation energy の検検 Discussion of the previous yearにin Activation of vitro activation and immunity in vitro, analysis of the method using いて, and immunization The キシナイトライト treatment シトクロムcではカスパーゼ-3 activation energy is low and the していることを见いだした. This year's は神経gluoblastoma culture cell にパーオキシナイトライトをeffectさせたoccasionのカスパーゼ-3およThe activation method of the upper stream is the immunological method with or without immunity, and the cutting activity of the photomimetic matrix is used. The cell viability rate is reduced by concentration-dependent にパーオキシナイトライト and the したにも关わらず and the なパーオ which are maintainedキシナイトライト treatment によりカズパーゼ-3 および-9 activation and inhibition されることがshows された.また, short-term のパーオキシナイトライト processing ではアポトーシスが carried out することが Show された. The phenomenon of in vitro system and cultured cell line has been investigated. 2. The use of パーオキシナイトライト treated による cultured cells with シトクロムcのmodification and reflection The ライト treatment of the によってラット神経glucoblast cultured cells contains the 12〓14kDa close protein がニトロ化されることが明らかとなった. Cultured cell processing technology Intracellular sterilization method Handle it with いて検したところ、パーオキシナイトライトIntracellular でシトクロムcがニトロ化されることがshows された.さらにin The in vitro system is a でニトロ化されたシトクロムcをadds water to decompose and modify the parts.ところ、Trp59およびTyr67を contains the むペプチド fragments に変化が観看された. 3. In the case of adding untreated シトクロムcをしたのカスパーゼ-3 activation energy Possibility of replying to the treatment of swollen gum disease Cell extraction solution, cell extraction solution, adjustment, addition of cell extract, and addition of cells - 3. Activation can restore energy and activate energy.