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ダイオキシンの毒性発現に関与する遺伝子の検索

寻找与二恶英毒性表达相关的基因

基本信息

批准号：
11771483
负责人：
榛葉繁紀
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771483/
关键词：
ダイオキシン脂肪細胞 Ahレセプター脂肪細胞分化 3T3-L1細胞

项目摘要

平成12年度においては、3T3-L1細胞の脂肪細胞分化におけるTCDDの阻害作用機序を明らかにする目的でTCDDによる3T3-L1細胞の分化抑制作用に関連した細胞内情報伝達ならびに遺伝子発現の変化を検討した。3T3-L1細胞の脂肪細胞への分化誘導は常法に従い行った。Rbタンパク質ならびに関連タンパク質の検出はウエスタンブロッティング法により行った。TCDD処理による遺伝子発現の変化はPCR-サブトラクション法(Clontech)を用いて行い、得られたクローンの発現量の再確認はリバースノーザン法を用いて行った。MAPKならびにJNK活性の測定は免疫沈降後行った。コントロール細胞において分化誘導剤添加48時間後に細胞増殖(clonal expansion)が観られたが、この際10nM TCDDを添加することにより細胞増殖は観察されず、その後の分化も抑制された。そこで分化誘導剤添加24時間後にTCDDを暴露し48時間後にRNAを抽出してサブトラクション法により検討した。その結果TCDDによる分化抑制にともない発現量が変化し、かつTCDDが毒性を示さない条件下(分化誘導剤添加78時間以降におけるTCDDの暴露)では変化を示さないクローンを単離した。またTCDD処理により脂肪細胞分化にともなうRBタンパク質のリン酸化ならびにp107のdown-regulationが阻害された。さらにp42/p44MAP kinase活性を測定したところTCDD処理により活性の上昇が認められた。

In 2012, the mechanism of TCDD inhibition in adipocyte differentiation of 3T3-L1 cells was investigated. The aim of this study was to clarify the relationship between TCDD inhibition and differentiation inhibition of 3T3-L1 cells. 3. The differentiation of adipocytes in T3-L1 cells was induced by normal methods. Rb-C-Rb-C-Rb-C- TCDD processing is used to detect and reconfirm the detection quantity of TCDD gene by PCR-based Clontech. MAPK and JNK activity were measured after immune sedimentation. Cell proliferation was observed after 48 hours of addition of TCDD. RNA was extracted 24 hours after TCDD was added to the induction medium and 48 hours after TCDD exposure. As a result, TCDD differentiation inhibition activity decreased and TCDD toxicity decreased under different conditions (differentiation inducer was added for 78 hours to decrease TCDD exposure). TCDD treatment prevents adipocyte differentiation and p107 down-regulation. The activity of p42/p44MAP kinase was determined by TCDD treatment.