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高頻度癌併発疾患患者血清中に見出される突然変異誘導の促進因子の解析

癌症常见并发症患者血清中促进突变诱导的因素分析

基本信息

批准号：
11771493
负责人：
野村純
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

I.突然変異誘導制御因子に対するモノクローナル抗体の作製これまでの我々の解析により、突然変異誘導制御と、変異原処理による細胞のプロテアーゼ誘導とに相関があることが知られている。この点に注目し、突然変異誘導制御に関与するプロテアーゼの同定を試みた。抗プロテアーゼ抗体を変異誘導が高頻度で起こる細胞と低頻度の細胞間でのサブトラクティブ免疫法にて作製した。プラスチックプレート上で、培養ヒト細胞の粗抽出液と作製したモノクローナル抗体を反応させ、固層化した。この抗原抗体複合体に各種プロテアーゼに特異的な蛍光人工基質をそれぞれ加え、37℃でインキュベートした。蛍光強度が増加した5クローンの抗体に関して抗原抗体複合体中のプロテアーゼの特徴について、各種プロテアーゼインヒビターを用いて解析したところ、これらの活性は、セリンプロテアーゼインヒビターにより強く阻害されることより、セリンプロテアーゼに属するものであることが示唆された。II.突然変異促進因子の遺伝子クローニング我々は、結節性硬化症(TS)の患者血清中に変異の誘導を促進する活性があることを見出している。更に、この変異誘導促進活性を、ヒトインターフェロンβに対する抗体YSB-1は抑制するが、YSB-2は抑制しないことが分かっている。この2種類の抗体の反応性の差に着目し、TS由来血清因子のcDNAを検索した。TS患者細胞由来のcDNA expression libraryからYSB-1に反応するがYSB-2には反応しないクローンを選別した。このうち、全長cDNAが得られた未知遺伝子TT4をサイトメガロウイルスプロモーターを持つベクターに組み込み、ヒト培養細胞にトランスフェクトし、変異誘導活性について解析した。この結果、TT4導入細胞では、変異誘導頻度が上昇している可能性が示唆された。

I. Sudden induction of regulatory factors in the production of anti-tumor antibodies. This point of attention, sudden change in the control of the relationship between the time and time to try Anti-tumor antibody is induced by high frequency and low frequency of intracellular antibody. The crude extract of cultured cells was prepared by reaction and stratification of antibody. The antigen-antibody complex is composed of various light artificial substrates at 37℃. The increase in the intensity of light is related to the characteristics of the antigen-antibody complex, the analysis of the activity of the antigen-antibody complex, the strong resistance of the antigen-antibody complex, and the analysis of the antigen-antibody complex. II. It has been shown that the gene kronenigma, a sudden change promoting factor, can promote the induction of sudden changes in serum activity in patients with tuberous sclerosis (TS). In addition, the antibody YSB-1 and YSB-2 inhibit the activity of different inducers. The difference in reactivity of these two types of antibodies was noted, and cDNA search for TS-derived serum factors was performed. cDNA expression library of TS patient cell origin from YSB-1 to YSB-2 The full-length cDNA of TT4 was obtained from cultured cells and analyzed for its activity. As a result, TT4-introduced cells showed an increased frequency of induction and a higher probability of induction.