脳におけるH^+-オリゴペプチドトランスポーターの局在と電気生理学的特性

H^+-寡肽转运蛋白在大脑中的定位和电生理特性

• 批准号: 11771505
• 负责人: 岡 卓也
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kyoto Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771505/
• 关键词: 脳シナプトソーム; オリゴペプチドトランスポータ; PEPT2; ジ・トリペプチド; キョートルフィン; RT-PCR; H^+oligopeptide transporter; synaptosomes; glycylsarcosine; Western 解析

平成11年度および12年度の2年間にわたる研究により、脳におけるdi/tripeptidesの取り込みを単離してきたsynaptosomeを用いて検討することで、この取り込み機構を担っているのは主として、high affinity type H^+/oligopeptide transporter (PEPT2)であることを明らかにすることができた。以下にその結果を示す。1.ラット脳シナプトソームを用いた検討により膜レベルでH^+/oligopeptide transporterの存在を明らかにした。すなわち、ラット脳シナプトソームへの[^<14>C]Glycylsarcosine(Gly-Sar)および[^3H]carnosine(β-Ala-His)の取り込み特性を検討した結果、上記ジペプチドの取り込みは単一の輸送系によりおこること、またH^+勾配を駆動力とする輸送担体であることが明らかとなった。速度論的解析により[^<14>C]Gly-Sar取り込みにおけるKinetic parameterはK_t=〜110μM、V_<max>=56.3nmol/min/mg proteinとなった。2.RT-PCRおよびWestern blot解析の結果、脳シナプトソーム画分にはhigh affinity type H^+/peptide transporter PEPT2が発現していることが示され、この結果は1で示した速度論解析の結果を裏付けるものであった。3.β-lactam antibioticsやACE inhibitorsがoligopeptide transporterの基質として認識されることが報告されていることから、脳シナプトソームにおけるPEPT2の基質認識特性について、[^<14>C]Gly-Sarの取り込み阻害実験により検討し、Kyotorphin(Tyr-Arg)やLeu-enkephalin分解物などがK_i=〜30μM程度のaffinityで競合阻害することが示された。今後は、この膜小胞系を用いてPEPT2の取り込み活性調節に関与する情報伝達系に関して検討を行っていく予定である。

In the past two years of Heisei 11 and 12, the research on high affinity type H^+/oligopeptide transporter (PEPT2) has been carried out. The results are shown below. 1. The existence of H^+/oligopeptide transporter is clearly revealed in the application of the system. [^<14>C]Glycylsarcosine(Gly-Sar) and [^3H]carnosine(β-Ala-His) were used to investigate the transport properties of the transport system. The kinetic <14>parameters K_t=~ 110μM, V_<max>=56.3nmol/min/mg protein were determined by Gly-Sar method. 2. The results of RT-PCR and Western blot analysis showed that the high affinity type H^+/peptide transporter PEPT2 was detected in the first place, and the results of velocity analysis in the second place. 3.β-lactam antibiotics and ACE inhibitors for oligopeptide transporter substrate recognition are reported in this paper.[^<14>C]Gly-Sar substrate recognition is reported in this paper. Kyotorphin(Tyr-Arg) and Leu-enkephalin decomposition are reported in this paper. In the future, this membrane cell system will be used to determine the relationship between the selection and activity regulation of PEPT2 and the information transmission system.

项目成果

Takuya Fujita: "Sigma receptor ligand-induced up-regulation of H^+/peptide transporter PEPT1 in the human intestinal cell line Caco-2"Control and Diseases of Sodium Dependent Transport Proteins and Ion Channels (Eds.By Suketa, Carafoli, Lazdunski, Mikoshi

Takuy​​a Fujita：“人肠细胞系 Caco-2 中 Sigma 受体配体诱导的 H^/肽转运蛋白 PEPT1 的上调”钠依赖性转运蛋白和离子通道的控制和疾病（编辑：Suketa、Carafoli、Lazdunski、

Takuya Fujita: "σ receptor ligand-induced up -regulation of the H^+/peptide transporter PEPT1 in the human intestinal cell line Caco-2."Biochemistry and Biophysics and Research Communications. 261. 242-246 (1999)

Takuy​​a Fujita：“人肠细胞系 Caco-2 中 σ 受体配体诱导的 H^+/肽转运蛋白 PEPT1 的上调。”《生物化学和生物物理学与研究通讯》261. 242-246 (1999)。

Takuya Fujita: "Functional characterization of brain peptide transporter in rat : Involvement of high affinity type H^+ peptide transporter PEPT2"Control and Diseases of Sodium Dependent Transport Proteins and Ion Channels (Eds.By Suketa, Carafoli, Lazdun

Takuy​​a Fujita：“大鼠脑肽转运蛋白的功能特征：高亲和力型 H^ 肽转运蛋白 PEPT2 的参与”钠依赖性转运蛋白和离子通道的控制和疾病（Suketa、Carafoli、Lazdun 编者）

Takuya Fujita: "σ receptor ligand-induced up-regulation of the H^+/peptide transporter PEPT1 in the human intestinal cell line Caco-2"Biochemical and Biophysical Research Communications. 261. 117-120 (1999)

Takuy​​a Fujita：“人肠细胞系 Caco-2 中 σ 受体配体诱导的 H^+/肽转运蛋白 PEPT1 的上调”《生物化学和生物物理研究通讯》261. 117-120 (1999)。

Takuya Fujita: "Interaction of kyotorphin and brain peptide transorter in synaptosomes prepared from rat cerebellum : implication of high affinity type H^+/peptide transporter PEPT2 mediated transport system"Neuroscience Letters. 271. 117-120 (1999)

Takuy​​a Fujita：“从大鼠小脑制备的突触体中京都啡肽和脑肽转运蛋白的相互作用：高亲和力型 H^/肽转运蛋白 PEPT2 介导的转运系统的含义”《神经科学快报》。