小腸上皮細胞に存在する有機アニオン排出機構の実証と分子クローニング

小肠上皮细胞存在的有机阴离子排泄机制的论证和分子克隆

• 批准号: 09772062
• 负责人: 岡 卓也
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Kyoto Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09772062/
• 关键词: calcein; 有機アニオン; Caco-2細胞; P-glycoprotein; Caco-2; organic anion; transporter

昨年度の研究に引き続き、有機アニオン性化合物calceinおよびcalcein-AMをプローブとして用い、Caco-2単層細胞における透過性を検討した。Calcein-AMは非常にユニークな特性を持つ化合物であり、そのままの形では非蛍光性でかつP-glycoprotein(MDR1)の基質として認識されるが、加水分解を受けcalceinに変換されると非常に強い蛍光を発しかつmultidrug resistance associated protein (MRP)-like protein(MLP)の基質として認識される。この性質を利用し、本研究ではcalcein-AMをCaco-2に取り込ませた後の蛍光強度を追跡することによりCaco-2のMLP活性を検討した。その結果、Caco-2細胞においてもラット消化管上皮と同様比較的強いMLP由来の輸送活性が認められ、これはprobenecidにより阻害された。また、この輸送活性はcytochrome P-450代謝酵素の誘導剤であるphenobarbitalにより制御されている可能性も示唆され、現在この機構に関しても分子生物学的手法を用いて検討中である。一方、P-glycoprotein(P-gp)の輸送活性が非イオン性界面活性剤Cremophor ELにより阻害される機構についても検討課題とした。その結果、P-gpのCremophor ELによる阻害は非競合的であることが明らかになるとともに、消化管に存在しているoligopeptide transporter(PepT1)やNa^+-dependent glucose transporter(SGLT1)の輸送活性には影響を与えていないことも明らかとなった。今後、Cremophor ELが他の1次性能動輸送担体に影響を及ぼしているか否かに関しても検討を行う予定である。

Yesterday annual の research に lead き 続 き, organic ア ニ オ ン sex compound calcein お よ び calcein - AM を プ ロ ー ブ と し て in い optimization, Caco - 2 単 layer of cells に お け る permeability を beg し 検 た. Calcein - AM very に は ユ ニ ー ク な features を hold つ compound で あ り, そ の ま ま の form で は non 蛍 light で か つ P - glycoprotein (MDR1) の matrix と し て know さ れ る が, add water decomposition を け Calcein に variations in さ れ る と very strong に い 蛍 light を 発 し か つ multidru g resistance associated protein(MRP)-like protein(MLP) <s:1> matrix と て て recognize される. こ の properties using を し, this study で は calcein - AM optimization を Caco - 2 に take り 込 ま せ た after の 蛍 light intensity を tracing す る こ と に よ optimization り Caco - 2 の MLP active を beg し 検 た. そ の optimization results, Caco - 2 cells に お い て も ラ ッ ト digestive tube epithelial と compared to others in the strong い MLP origin の が transport activity recognition め ら れ, こ れ は probenecid に よ り resistance against さ れ た. ま た, こ の conveying active は の metabolic enzyme cytochrome P - 450 induced tonic で あ る phenobarbital に よ り suppression さ れ て い も る possibility in stopping さ こ れ, now の institutions に masato し て も molecular biology technique を with い て 検 beg in で あ る. One party, the P - glycoprotein (P - gp) の conveying active が イ オ ン interface of sexual activity tonic Cremophor EL に よ り resistance against さ れ る institutions に つ い て も 検 for subject と し た. そ の results, P - gp の Cremophor EL に よ る resistance against は non competition で あ る こ と が Ming ら か に な る と と も に, digestive tube に exist し て い る oligopeptide from (PepT1) や Na ^ + - dependent glucose The <s:1> transport activity of transporter(SGLT1) に に affects を and えて な な <s:1> と と と, which is clearly defined in ら ら となった となった. In the future, Cremophor EL が の 1 time he performance influencing を and conveying bear body に ぼ し て い る か no か に masato し て も 検 line for を う designated で あ る.

项目成果

T.Fujita & A.Yamamoto: "Efflux mechaism of organic anions mediated by active....." Proc.Int.Symp.Controlled Release Bioact.Mater.25. 675-676 (1998)

藤田先生

Ying-shu Quan, T.Fujita et al.: "Transport kinetics of leucine-enkephalin across Caco-2......" Life Sci.64. 1243-1252 (1999)

Ying-shu Quan、T.Fujita 等：“亮氨酸脑啡肽跨 Caco-2 的转运动力学......”Life Sci.64。

T.Fujita et al.: "Permeability characteristics of acyl-tetragastrins across the ..." Pharmaceut.Res.15. 1387-1392 (1998)

T.Fujita 等人：“酰基四胃泌素穿过……的渗透性特征”Pharmaceut.Res.15。

Fujita,T.et al.: "Calcein in excreted from the intestinal mucosal cell membrane by the active transport system." Life Sciences. 60(4/5). 307-313 (1997)

Fujita,T.et al.：“钙黄绿素通过主动转运系统从肠粘膜细胞膜中排出。”

H.Tozaki, T.Fujita et al.: "Colon specific delivery of R68070,a new thromboxane......" Life Sci.64. 1155-1162 (1999)

H.Tozaki、T.Fujita 等人：“R68070 的结肠特异性递送，一种新的血栓素……”Life Sci.64。