^<31>P-NMRを用いたグルタミン酸受容体リン酸化の解明とその生理学的意義

^<31>利用P-NMR阐明谷氨酸受体磷酸化及其生理意义

• 批准号: 11780588
• 负责人: 平井 宏和
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11780588/
• 关键词: グルタミン酸受容体; リン酸化; PKC; GluR2; NMR; LTD; 記憶; ^<31>P-NMR; フォスフォリルコリン; フォスファチジルコリン; ディアシルグリセロール; リン脂質代謝; HEK; mGluR1

グルタミン酸は、哺乳類の中枢神経系において、主要な興奮性神経伝達物質である。グルタミン酸受容体のリン酸化は、記憶や学習の粗過程と考えられているシナプス伝達の長期増強(LTP)や長期抑圧(LTD)に大きく関与することが明らかになっており、最近多くの研究者の注目を集めている。リン酸化の研究を進めるにあたっての大きな問題点は、放射性物質を必要とすることであり、とくに培養細胞や脳切片を使った実験においては、一回の測定で数十ミリキューリーの^<32>Pを必要とし、実験者の人体に対する影響は当然のことながら、その廃棄物処理においても、環境に与える影響も甚大である。これらの問題点を解決するために、非放射性の^<31>P-NMRを用いたin vitroでのタンパク質のリン酸化測定法を開発し、その方法を用いてグルタミン酸受容体のリン酸化部位を同定した。AMPA型グルタミン酸受容体GluR2サブユニットの細胞内カルボキシ末端領域はカルシウム依存性タンパクリン酸化酵素(PKC)によりリン酸化された。また、リン酸化シグナルのケミカルシフトの差により、GluR2のカルボキシ末端領域には少なくとも3ケ所のリン酸化部位が存在し、そのうち1つは880番目のセリンであることが示唆された。この情報に基づき、GluR2のセリン880番を特異的に認識する抗体を作成し、神経細胞においてもGluR2のセリン880番がPKCによりリン酸化を受けることを証明した。ごく最近の研究により、この部位のリン酸化がシナプス後膜上のAMPA型グルタミン酸受容体密度を調節し、小脳に惹起されるLTDに重要な役割を果たすことが明らかになった。このことは本研究結果が有用であったことを示す例である。

グルタミン酸は、哺乳類の中枢神経系において、主要な興奮性神経伝達物質である。有机硅酸受容体的选择性酸化，有机化学实验过程中的试验性规范。放射性化学研究中，放射性物质必须经过放射性核素检查才能确定放射性核素的位置，放射性核素的细胞切片必须经过放射性核素检查才能确定放射性核素的位置，一回放射性核素检查确定放射性核素的数量，放射性核素检查确定放射性核素的位置<32>。非放射性核素<31>P-NMR法用荧光素体外荧光定量法测定荧光素，非放射性核素P-NMR法用荧光素体外荧光定量法测定荧光素，非放射性核素P-NMR法用荧光素体外荧光定量法测定荧光素，非放射性核素P-NMR法用荧光素体外荧光定量法测定荧光素。AMPA型谷氨酸受体GluR2是一种新型的谷氨酸受体，它可以使细胞内的谷氨酸受体末端区域的谷氨酸依赖性磷酸化酶（PKC）的活性降低。葡萄糖，谷氨酸末端酯化酶抑制剂，谷氨酸二酯酶抑制剂，谷氨酸末端区域减少的氨基酸残基，3所述的谷氨酸末端酯化部分存在的，谷氨酸1，880个项目的氨基酸残基，均显示为氨基酸残基。糖尿病情况下，GluR2受体激动剂880可诱导的胰蛋白酶抗体组成，神少细胞癌基因型GluR2受体激动剂880可诱导蛋白激酶C的表达。美国最近的研究申请，在美国部分非酒精化的非酒精化膜上的AMPA型乳酸盐受容体浓度范围内，小分子起着重要的切割作用。このことは本研究結果が有用であったことを示す例である。

项目成果

平井宏和、吉岡敬太郎、山田和廣: "Phosphatidylcholine biosynthesis by mGluR1α expressed in human embryonic kidney 293 cells-A^<31>P-NMR study"Molecular and Cellular Neuroscience. 14. 444-454 (1999)

Hirokazu Hirai、Keitaro Yoshioka、Kazuhiro Yamada：“人胚胎肾293细胞中表达的mGluR1α的磷脂酰胆碱生物合成-A^31>P-NMR研究”分子和细胞神经科学14. 444-454（1999）。

平井宏和: "A simple method using ^<31>P-NMR spectroscopy for the study of protein phosphorylation"Brain Research Protocol. 5. 182-189 (2000)

Hirokazu Hirai：“使用 31 P-NMR 光谱研究蛋白质磷酸化的简单方法”Brain Research Protocol。5. 182-189 (2000)。