エストロジェンによるロードシス発現に伴う視床下部ニューロン興奮特性の変化

与雌激素诱导的脊柱前凸相关的下丘脑神经元兴奋特性的变化

• 批准号: 12770034
• 负责人: 濱田 知宏
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770034/
• 关键词: エストロジェン; エストロジェン受容体; トランスジェニック; 視床下部腹内側核; ロードシス; 電気生理学

発情期のげっ歯類の雌に見られるエストラジオール(E_2)依存性のロードシス発現には、中脳灰白質(PAG)に投射している視床下部腹内側核(VMH)のE_2感受性ニューロンが重要な役割を演じている。このニューロンに関する細胞レベルでの生理学的特性を明らかにするために、前年度の結果(投稿準備中)より、後部PAGの腹側に逆行性トレーサーを注入することで、生きた状態で蛍光ラベルされたVMHニューロンについてslice patch clamp法を用いた電気生理学的な検討を行った。まず視床下部で重要なトランスミッターであるGABAに対する反応性について検討を試みたが、細胞が非常に脆弱で、あまりデータが得られなかった。この原因は同条件で視索前野ニューロンについて記録可能であるためVMHニューロンの性質に起因すると考えられるが、一方で蛍光トレーサーの副作用である可能性も考えられる。現在、視床下部スライス作製時の条件の再検討を行っている。また実験計画には記載されていなかったが、E2感受性ニューロン、さらに言えばエストロジェン受容体を含有するニューロンを生きた状態で可視化する目的で、α型ER遺伝子のプロモーターに蛍光タンパクであるGFPを結合させたトランスジェニックラットを作製した。GFPの蛍光は脳内で確認され、視床下部のみならず、大脳皮質や海馬にもGFPでラベルされたニューロンが存在しており、免疫組織化学的にα型ERとの共存も確認された。今後はこのトランスジェニックラットのPAGに逆行性トレーサーを注入し、GFPと二重ラベルされた細胞について膜特性、特にエストロジェンの作用に着目して電気生理学的な研究を進めて行くつもりである。

E_2-dependent neurogenesis in the female optic nucleus (VMH) during development is an important neurogenesis in the ventral medial nucleus of the inferior optic bed (VMH), projected by the middle gray line (PAG). The physiological characteristics of the cells involved in this study were investigated using the slice clamp method. The results of the previous year (in preparation for submission) were injected into the ventral side of the posterior PAG. In the lower part of the visual field, there are important factors such as GABA, anti-GABA and anti-GABA. The cause of this is the same as the condition of the previous field. The nature of the VMH is the cause of the side effect of the VMH. Now, the lower part of the viewing table is under the condition of re-examination. For the purpose of visualizing the state of production of α-type ER receptor, the project records the sensitivity of E2 to GFP and its binding to GFP. GFP was identified by fluorescence in the optic bed, in the hippocampus, in the cortex and in the hippocampus. Immunohistochemical staining confirmed the presence of GFP in the hippocampus. In the future, we will focus on the study of electrophysiology of PAG, GFP, and double cell membrane properties and the role of PAG in retrograde injection, GFP, and double cell membrane properties.