遺伝子改変F9細胞株を用いた生体バリアの機能解析

使用转基因 F9 细胞系进行生物屏障功能分析

• 批准号: 12770114
• 负责人: 千葉 英樹
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770114/
• 关键词: F9; ノックアウト細胞; 遺伝子発現誘導; Cre; loxP; タイト結合; クローディン; レチノイド; 核内受容体; クローデイン

タイト結合は、上皮・内皮の最も内腔側に存在する細胞間接着装置で、細胞間の選択的透過性を制御するバリア機能の本態である。近年いくつかのタイト結合関連分子が見い出されており、膜貫通分子claudinは少なくとも20種類からなる遺伝子ファミリーを形成することが明らかとなった。マウスF9細胞株は、レチノイン酸存在下で培養すると、上皮様細胞に分化する。我々は、F9細胞株にリガンド依存性Creリコンビナーゼ(Cre-ER^T)とreverse tetracycline-controlled transactivator (rtTA)を恒常発現させ、多数の遺伝子の導入・ノックアウトと遺伝子発現の時間的・量的調節が行なえる遺伝子改変F9細胞株(F9:rtTA : Cre-ER^T L32T2)を樹立した(Exp.Cell Res.260,334-339,2000)。また本細胞株を用いて、1)レチノイン酸がclaudin-6,claudin-7,occludin分子の発現や、タイト結合のバリア機能を誘導すること、2)タイト結合の新生過程では、小さな分子に対するバリアが大きな分子に比べて先行して形成されること、3)レチノイン酸がタイト結合に及ぼす作用は、特定のレチノイドX受容体-レチノイン酸受容体(RXR-RAR)二量体によって伝達されることを示した(Exp.Cell Res.263,163-172,2001)。本細胞株は、生体バリアの本態であるタイト結合の構築・機能・制御機構を分子レベルで明らかにし、タイト結合の破綻による種々の病態の成立・治療に貴重な情報を提供することが期待される。

The cell adhesion mechanism and the control of the permeability of the cell to cell exist in the innermost lumen of the epithelium and endothelium. In recent years, there have been 20 kinds of molecules involved in the formation of claudin. F9 cell line was cultured in the presence of acid and differentiated into epithelial cells. In response, F9 cell line Cre-dependent genes (Cre-ER^T) and reverse tetracycline-controlled activator (rtTA) are constantly present, and most of the genes introduced into F9 cell line Cre-ER^T are regulated in the amount of time it takes for gene development (Exp.Cell Res. 260, 334 - 339, 2000). This cell line is used to: 1) induce the development and binding of claudin-6,claudin-7,occludin molecules; 2) initiate the formation of claudin molecules prior to the formation of claudin-6,claudin-7,occludin molecules; 3) induce the formation and binding of claudin-6, claudin-7, occludin molecules prior to claudin-6, claudin-7, occludin molecules; Specific X-receptor-RXR-RAR (Exp.Cell Res. 263, 163 - 172, 2001). This cell line is expected to provide valuable information on the structure, function, control mechanism, molecular structure, defect, disease, and treatment of the cell line.

项目成果

千葉英樹: "培養細胞における新しい遺伝子ノックアウト法"「実験医学」クローズアツプ実験法1999-2001. (印刷中).

千叶秀树：“培养细胞中的新基因敲除方法”《实验医学》特写实验方法1999-2001（出版中）。

Li M. et al.: "RXR α ablation in skin keratinocytes results in alopecia and epidermal alterations"Development. 128. 675-688 (2001)

Li M. 等人：“皮肤角质形成细胞中的 RXR α 消融导致脱发和表皮改变”开发。 128. 675-688 (2001)。

Li, M.et al.: "RXR α ablation in skin keratinocytes results in alopecia and epidermal alterations"Development. 128. 675-688 (2001)

Li, M.等人：“皮肤角质形成细胞中的 RXR α 消融导致脱发和表皮改变”开发。 128. 675-688 (2001)。

Utsumi H. et al.: "Expression of GFR α-1, receptor for GDNF, in rat brain capillary during postnatal development of the BBB."Am.J.Physiol.Cell Physiol.. 276. C361-C368 (2000)

Utsumi H. 等人：“出生后 BBB 发育期间大鼠脑毛细血管中 GFR α-1（GDNF 受体）的表达。Am.J.Physiol.Cell Physiol.. 276. C361-C368 (2000)

Chiba, H. et al.: "F9 embryonal carcinoma cells engineered for tamoxifen-dependent Cre-mediated site-directed mutagenesis and doxycycline-inducible gene expression"Exp.Cell Res.. 260. 334-339 (2000)

Chiba，H.等：“为他莫昔芬依赖性Cre介导的定点诱变和多西环素诱导的基因表达而工程化的F9胚胎癌细胞”Exp.Cell Res.. 260. 334-339 (2000)