分子生物学的アプローチによる難治性寄生虫感染症の血清診断法の開発

利用分子生物学方法开发难治性寄生虫感染的血清诊断方法

基本信息

批准号：
12770122
负责人：
迫康仁
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Asahikawa Medical College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

新興・再興感染症として世界規模で流行し汚染地域拡大が年々深刻化している人体寄生条虫症の1つである有鉤嚢虫症の高品質な診断用抗原の安定供給とそれを用いた血清診断法の国際標準化を最終的な目的としている。本研究では、前年度に確立した組換え抗原を用いた血清診断法の評価を行うとともに、分離株間の遺伝子多型について解析を行った。1)組換え蛋白質を用いた有鉤嚢虫血清診断法の評価組換え抗原は、有鉤嚢虫症に対する特異性は十分なものの、感度の点で問題があった。すなわち、有鉤嚢虫の多数寄生の場合は9割近くの特異抗体を検出することができたが、1個体寄生の場合、有鉤嚢虫液より精製した抗原分子を用いた診断では9割近くを陽性と判断できるのに対し、組換え蛋白質では7割前後までにその感度が減少した。抗原蛋白質をコードする遺伝子は多重遺伝子ファミリーを形成していることが明らかとなっているため、更なる遺伝子のクローニングの必要性が示唆された。また、本抗原蛋白質は高度に糖鎖修飾を受けている分子であることから、有鉤嚢虫特異的な糖鎖構造の抗原としての重要性も示唆された。2)分離株間の抗原遺伝子多型分離株(中国、インドネシア、エクアドル、ペルー)ゲノムDNAより抗原遺伝子をPCRにより増幅し、その遺伝子構造および遺伝子多型について解析した。その結果、抗原遺伝子は3つのエクソンと2つのイントロンを有していた。また、分離株間で極めて高い相同性(98%)を示した。これより、組換え蛋白質を用いた血清診断において熟慮しなければならない分離株間の抗原性の多様性を克服することが出来得ると示唆された。

最终目标是为囊性囊性功能障碍提供稳定的高质量诊断抗原，这是世界上寄生虫的tamagodisis之一，这是一种新兴和重新出现的感染性疾病，每年都会扩大污染区域，并扩展使用使用它们的血清诊断方法的国际标准化。在这项研究中，我们使用上一年中建立的重组抗原评估了血清诊断，并分析了分离株之间的遗传多态性。 1）使用重组蛋白评估血清诊断方法的重组抗原对唾液酸菌病具有足够的特异性，但在敏感性方面存在问题。换句话说，在大量囊性级联反应的情况下，检测到近90％的特定抗体，但是在单个寄生虫的情况下，将近90％的抗原分子使用从囊性级联反应中纯化的抗原分子的病例可以确定为阳性，而在70％左右的情况下则是重生蛋白质的降低的情况，而在较大的蛋白质上则是阳性的。已经揭示了编码抗原蛋白的基因形成多基因家族，这表明需要进一步的基因克隆。此外，由于该抗原蛋白是一种高度糖基化的分子，因此也有人提出，它作为特异性杀性造成因果的糖基化结构的抗原很重要。 2）分离株（中国，印度尼西亚，厄瓜多尔，秘鲁）抗原基因之间的抗原基因多态性通过基因组DNA的PCR扩增，并分析了它们的基因结构和多态性。结果，抗原基因具有三个外显子和两个内含子。它在分离株中还显示出极高的同源性（98％）。这表明有可能克服分离株之间抗原性的多样性，这在使用重组蛋白的血清诊断中必须考虑。