分子生物学的アプローチによる難治性寄生虫感染症の血清診断法の開発

利用分子生物学方法开发难治性寄生虫感染的血清诊断方法

• 批准号: 12770122
• 负责人: 迫 康仁
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Asahikawa Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770122/
• 关键词: 有鉤嚢中症; 組換え抗原; 血清診断; 遺伝子多型; 有鉤嚢虫症; 遺伝子クローニング; 組換え蛋白質

新興・再興感染症として世界規模で流行し汚染地域拡大が年々深刻化している人体寄生条虫症の1つである有鉤嚢虫症の高品質な診断用抗原の安定供給とそれを用いた血清診断法の国際標準化を最終的な目的としている。本研究では、前年度に確立した組換え抗原を用いた血清診断法の評価を行うとともに、分離株間の遺伝子多型について解析を行った。1)組換え蛋白質を用いた有鉤嚢虫血清診断法の評価組換え抗原は、有鉤嚢虫症に対する特異性は十分なものの、感度の点で問題があった。すなわち、有鉤嚢虫の多数寄生の場合は9割近くの特異抗体を検出することができたが、1個体寄生の場合、有鉤嚢虫液より精製した抗原分子を用いた診断では9割近くを陽性と判断できるのに対し、組換え蛋白質では7割前後までにその感度が減少した。抗原蛋白質をコードする遺伝子は多重遺伝子ファミリーを形成していることが明らかとなっているため、更なる遺伝子のクローニングの必要性が示唆された。また、本抗原蛋白質は高度に糖鎖修飾を受けている分子であることから、有鉤嚢虫特異的な糖鎖構造の抗原としての重要性も示唆された。2)分離株間の抗原遺伝子多型分離株(中国、インドネシア、エクアドル、ペルー)ゲノムDNAより抗原遺伝子をPCRにより増幅し、その遺伝子構造および遺伝子多型について解析した。その結果、抗原遺伝子は3つのエクソンと2つのイントロンを有していた。また、分離株間で極めて高い相同性(98%)を示した。これより、組換え蛋白質を用いた血清診断において熟慮しなければならない分離株間の抗原性の多様性を克服することが出来得ると示唆された。

Emerging, emerging infectious diseases, worldwide epidemic, regional contamination, deepening of human parasitic diseases, stable supply of high-quality diagnostic antigens for hookworm disease, and the ultimate goal of international standardization of serological diagnostics In this study, we established the evaluation of serological diagnostic methods for antigen exchange in previous years, and analyzed the genetic polymorphism among isolates. 1) The use of group protein in the diagnosis of hookworm serum evaluation of group antigen, hookworm disease, specificity, sensitivity and other issues In most cases of parasitism, the specific antibody of 9 cuts was detected, and in 1 case of individual parasitism, the antigen molecule of 9 cuts was purified, and the sensitivity of 7 cuts was reduced. Antigen protein protein expression vector is a multiple expression vector, and the necessity of protein expression vector is demonstrated. This antigen protein is highly modified by glycogen, which shows the importance of glycogen specific constructs. 2) Antigen gene polymorphism among isolates (China, India, Turkey, Turkey) requires DNA amplification of antigen gene PCR, amplification of gene structure and analysis of gene polymorphism. The result is that the antigen gene has a 3-fold increase in sensitivity and 2-fold increase in sensitivity. The similarity among isolates was high (98%). This is the first time that antigenics have been identified in the world.

项目成果

Yasuhito SAKO: "Molecular characterization and diagnostic value of Taenia solium low-molecular-weight antigen genes"Journal of Clinical Microbiology. 38・12. 4439-4444 (2000)

Yasuhito SAKO：“猪带绦虫低分子量抗原基因的分子特征和诊断价值”临床微生物学杂志 38・12 4439-4444（2000）。

Yasuhito SAKO: "Recent advances in serodiagnosis for cysticercosis"Southeast Asian Journal of Tropical Medicine and Public Health. (印刷中).

Yasuhito SAKO：“囊尾蚴病血清诊断的最新进展”《东南亚热带医学和公共卫生杂志》（正在出版）。