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ポストゲノムプロジェクトにおけるプロテオーム解析

后基因组计划中的蛋白质组分析

基本信息

批准号：
12770129
负责人：
清水健
金额：
$ 1.34万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

ウェルシュ菌では二成分制御系の一つであるVirR/VirSシステムが多くの病原因子の発現を総括的に調節していることが知られている。網羅的にVirR/VirSシステムによって発現が調節されているタンパク質を明らかにするために野生株とvirR変異株を用いてプロテオーム解析を行った。培養上清を用いて2次元電気泳動を行い、野生株とvirR変異株の培養上清を用いた2-Dゲル上で強度に変化のあったスポットを同定し、質量分析機を用いた方法で遺伝子を特定した。その結果、VirR/VirSシステムによって正に調節されている7種類のタンパク質と負に調節されている8種類のタンパク質を特定した。その中には、すでに病原因子と報告されているα毒素やθ毒素が存在していた。これらタンパク質は転写レベルにおいて調節されているかどうかを確かめるためにノーザン解析を行った。15種類のうち9種類の遺伝子は転写レベルにおいてVirR/VirSシステムによって調節されていたが、残りはそうではなく、タンパク質の翻訳、修飾の段階で調節されていることが示唆された。また、同時に野生株とvirR変異株を用いた培養上清のプロテオームによってVirR/VirSシステムが直接的に発現調節している新規のプロテアーゼを同定した。培養上清中より新規プロテアーゼを精製し、そのプロテアーゼがシステインプロテアーゼであることを特定し、ウェルシュ菌の新規病原因子である可能性を示した。

The VirR/VirS system regulates the development of multiple pathogenic factors. VirR/VirS system development and analysis The culture supernatant was determined by 2-D electrokinetic method, and the wild strain was determined by 2-D electrokinetic method. As a result, VirR/VirS system has 7 kinds of positive and negative regulation, and 8 kinds of negative regulation. The presence of alpha toxin and theta toxin is reported in all pathogenic factors. This is the first time I've ever seen a woman who's had sex with someone else. 15 species of VirR/VirS system, 9 species of VirR/S system, 9 species of VirR system, 9 species of VirS system, 9 species of VirR/S system, 9 species of VirS system, 9 species of VirR/S system, 9 species of VirR system VirR/VirS system is used to regulate the development of wild and mutant plants directly. Culture supernatant, the new species, the new species.