多発性硬化症における免疫調節細胞の病態制御機構について

免疫调节细胞在多发性硬化症中的病理控制机制研究

• 批准号: 12770330
• 负责人: 清水 優子
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770330/
• 关键词: 多発性硬化症; IFN-β1b; Natural Killer(NK)細胞; NKT細胞; _<γ>δT細胞; IL-4; IFN-γ; 多発性硬化性; γδT細胞; NK細胞

目的:Natural killer細胞(NK細胞),Natural killer T細胞(NKT細胞),_<γ>δT細胞は免疫調節に重要な役割を担っているとされ近年注目されている.特に,IL-2反応性_<γ>δT細胞はNK細胞の役割を持ち,多発性硬化症(MS)ではこれらの細胞の重要性が注目されている.本邦では2000年、IFN-β1bがMSの治療薬として承認されるに至った.今回我々は.IFN-β1β療法を施行したMS患者において,これら免疫調節細胞の変化について比較検討を報告する.対象:IFN-β1β投与(2MIU〜8MIU:隔日皮下注射)を施行したMS患者9例(男性3例、女性6例),平均年齢39.2±13.7歳.臨床型はsecondary progressive MS 6例,relapsing-remitting MS3例.方法:IFN投与前と投与1ケ月後で以下を比較検討した.1.患者末梢血単核球(PBMC)を分離,FACSを用いCD56+CD16+細胞(NK細胞)、Vα24+Vβ11+CD3+細胞(NKT細胞),CD56+δ-1+CD3+細胞(NK_<γ>δT細胞)の陽性率を測定.2.分離した単核球をIL-2(100U/ml)添加で短期培養を行い,上記を測定.3.K562細胞を標的細胞,IL-2反応性T細胞をeffectoer細胞とし,E/T比10:1の細胞障害活性%をLDH定量法によって測定.4.PBMCよりtotal RNAを抽出,RT-PCR法でサイトカイン(IFN-_<γ>,IL-4)のmRNA発現を検討.結果:1.CD16+56+細胞(NK細胞)はIFN投与前後で23.2±17.6%→21.9±16.9%と変化なし.IL-2培養後は40.0±19.3%→44.4±21.9%と軽度増加.2.Vα24+Vβ11+CD3+細胞(NKT細胞)はIFN投与前後で0.026±0.023%→0.307±0.044と増加.IL-2培養後はIFN投与後、0.065±0.03→0.1±0.05%へ増加(p=0.4).3._<γ>δT細胞はIFN投与前後で5.9±3.6%→4.9±2.3%と低下(p=0.1)。IL-2培養でIFN投与後、37.2±41.3%→16.2±12.7%へ低下(p=0.1).4.CD56+_<γ>δT(NK_<γ>δT)細胞はIFN投与前後で2.3±2.7%→1.8±1.9%と変化なし.IL-2培養後ではIFN投与後,17.2±26.7%→8.4±12.0%へ低下した(p=0.2).5.IFN投与後、細胞障害活性%は25.2±20.3%→46.3±22.8%へ増加(p=0.1).6.サイトカインmRNA発現は、IFN投与前後ともに全例IFN-_<γ>のmRNAは発現,2例ではIFN投与後IL-4のmRNA発現も認められた.考察:IFN-β1β投与後にNK細胞,NKT細胞,IL-2反応性NK細胞,NKT細胞の増加により,NK細胞,NK T細胞のeffectorとしての細胞障害機能がIFN-βにより是正された可能性が示唆された.IFN-β1βによりIL-4のmRNAの発現が認められたことから,一部の症例ではTh2誘導が認められ、治療効果をきたしている可能性が考えられた.今後も継続して,これら免疫調節細胞の動態について検討を行う予定である.

Objective:Natural killer cells (NK cells),Natural killer T cells (NKT cells), and_<γ>δT cells are important in immune regulation and have attracted attention in recent years. In particular,IL-2-resistant delta T cells maintain NK cell activity, and the importance of these cells in multiple sclerosis (MS) is highlighted. In 2000, IFN-β1b was recognized as a therapeutic agent for MS in our country. This paper reports a comparative study of IFN-β1β therapy in MS patients and the changes in immune regulatory cells. AIM:IFN-β1β (2MIU ~ 8MIU: subcutaneous injection every other day) was administered to 9 MS patients (3 males and 6 females) with an average age of 39.2±13.7 years. 6 cases were secondary progressive MS and 3 cases were relapsing-remitting MS. Methods: 1. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were isolated and FACS was used to detect CD56 + CD16 + cells (NK cells), Vα24+Vβ11+ CD3 + cells.(NKT cells), CD56 +δ-1 + CD3 + cells (NK_<γ>δT cells) positive rate determination. 2. isolation of IL-2 3. K562 cells as target cells,IL-2-resistant T cells as effector cells,E/T ratio 10:4. Total RNA was extracted from PBMC and mRNA expression of IFN-γ,IL-4 was detected by RT-PCR. Results: 1. CD16 +56+ cells (NK cells) changed from 23.2±17.6% to 21.9±16.9% before and after IFN treatment.IL-2 cells increased from 40.0±19.3% to 44.4±21.9% after IFN treatment. 2. V α24+Vβ11+ CD3 + cells (NKT cells) increased from 0.026±0.023% to 0.307±0.044 before and after IFN treatment.IL-2 cells increased from 0.065±0.03 to 0.1±0.05% after IFN treatment (p=0.4). <γ>δT cells decreased from 5.9±3.6% to 4.9±2.3%(p=0.1). IL-2 culture decreased after IFN treatment from 37.2±41.3% to 16.2±12.7%.(p=0.1).4.CD56+_<γ>δT (NK_<γ>δT) cells decreased from 2.3±2.7% to 1.8±1.9% after IFN treatment.IL-2 cells decreased from 17.2 ±26.7% to 8.4±12.0% after IFN treatment. 5. After IFN administration, the percentage of cell damage activity increased from 25.2±20.3% to 46.3±22.8%(p=0.1). 6. The mRNA expression of IFN-γ was detected in all cases before and after IFN administration, and IL-4 mRNA expression was detected in 2 cases after IFN administration. We investigated the possibility of IFN-β 1β-induced IL-4 mRNA expression in NK cells,NKT cells,IL-2-reactive NK cells,NKT cells,NK cells, and NK T cells. In the future, the immune regulatory cell dynamics will be discussed.

项目成果

清水優子 その他: "急性散石性脳脊髄炎における免疫吸着療法の有用性"東京女子医大誌. 70巻臨時増刊. E386-E392 (2000)

Yuko Shimizu 等：“免疫吸附疗法在急性弥漫性脑脊髓炎中的作用”，东京女子医科大学杂志第 70 卷特刊（2000 年）。

清水 優子 ら: "片頭痛の層別化治療戦略と段階的治療戦略の比較"JAMA日本語版. 22・10. 69-76 (2001)

Yuko Shimizu 等：“偏头痛的分层和逐步治疗策略的比较”JAMA 日语版 22・10（2001）。

清水 優子 ら: "エビデンスに基づいた片頭痛対策への展望"JAMA日本語版. 22・10. 76-79 (2001)

Yuko Shimizu 等：“基于证据的偏头痛对策的展望”JAMA 日语版 22・10（2001 年）。

清水優子 その他: "高伝性抗レトロウィルス療法が有効であった後天性免疫不全症候群にともなう進行性多重性白質脳症の1例"臨床神経学. 40巻8号. 821-826 (2000)

Yuko Shimizu 等人：“与获得性免疫缺陷综合征相关的进行性多发性白质脑病，其中高传导性抗逆转录病毒治疗有效”，《临床神经病学》第 40 卷，第 821-826 期（2000 年）。

清水 優子 ら: "子宮体癌に伴うTransseay症候群による若年性脳梗塞"臨床神経学. 41・4/5. 248 (2001)

Yuko Shimizu 等人：“与子宫内膜癌相关的 Transseay 综合征引起的青少年脑梗死”《临床神经病学》41, 248 (2001)。