新しい造血肝細胞体外増幅法の実用化

新型造血肝细胞体外扩增方法的实际应用

• 批准号: 12770557
• 负责人: 高橋 宗春
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770557/
• 关键词: 造血幹細胞; 体外増殖; レトロウイルス; Notch; HES; 体外増幅; アデノウイルス; AGM

造血幹細胞の試験管内増幅は、現在の造血幹細胞移植療法を補完する上でも、また将来の遺伝子治療や人工血液の開発の上でも、極めて応用性の高い技術である。この技術開発を行う上で肝要なことは、いかにして分化させることなく幹細胞を増幅するかという点である。Notchは細胞膜受容体型の糖蛋白質であり、細胞の分化を抑制するシグナルを伝達する。このため、造血幹細胞を未分化なまま体外で増幅する技術の開発につながるのではないかと期待されている。本研究では、Notchのシグナルを用いて造血幹細胞の体外増幅の可能性を検討した。当初アデノウイルスを用いていたが、最近レトロウイルスベクターの改良により、幹細胞活性を持つ細胞への遺伝子導入が容易に行うことができるようになった。本研究ではレトロウイルスベクターを用い、Notchシグナル分子であるHES-1をマウス骨髄造血幹細胞分画(Lin-Scal+c-Kit+CD34-)に導入した。これを放射線照射同系マウスに移植することにより、造血幹細胞が試験管内およびレシピエントマウス個体内で、コントールに比べより維持されるか否かを検討した。HES-1導入造血幹細胞は試験管内で2日間、および移植されたマウス個体で3ヶ月、コントロール細胞に比較してより維持され、全ての系統の造血細胞を再構築した。HES-1シグナルは、造血幹細胞の体外増幅に有用と考えられた。今後は、NotchリガンドによりHES1の発現誘導が得られること、および、Notchリガンドを用いてHES1導入と類似の効果が得られることの検証を行う計画である。

Hematopoietic stem cell の test tube raised は, now の を fill after hematopoietic stem cell transplantation therapy す る on で も, ま た future の heritage 伝 son treatment や artificial blood の open 発 の on で も, extremely め て 応 use sex の high い technology で あ る. こ の technology open 発 を う で on liver to な こ と は, い か に し て differentiation さ せ る こ と な く stem cells を rights of す る か と い う point で あ る. Notch inhibits the cell membrane receptor-type <s:1> glycoprotein であ and cell <s:1> differentiation を するシグナ を伝 を伝 up to する. こ の た め, hematopoietic stem cells を undifferentiated な ま ま で raised in vitro of す る technology の open 発 に つ な が る の で は な い か と expect さ れ て い る. In this study, で で and Notch <s:1> シグナ を を を を used the possibility of in vitro growth of <s:1> て hematopoietic stem cells <e:1> を検 to explore <s:1> た. Original ア デ ノ ウ イ ル ス を with い て い た が, recently レ ト ロ ウ イ ル ス ベ ク タ ー の improved に よ り, stem cells activated を hold つ へ の heritage 伝 son import が line easily に う こ と が で き る よ う に な っ た. This study で は レ ト ロ ウ イ ル ス ベ ク タ ー を い, Notch シ グ ナ ル molecular で あ る hypothesis 1 を マ ウ ス bone marrow hematopoietic stem cells points draw (Lin - Scal Kit + CD34 + c - -) に import し た. こ れ を radiation homologous マ ウ ス に transplantation す る こ と に よ り, hematopoietic stem cells が test tube お よ び レ シ ピ エ ン ト マ ウ ス within individual で, コ ン ト ー ル に than べ よ り maintain さ れ る か no か を beg し 検 た. Hypothesis 1 import hematopoietic stem cells は で 2 day, test tube お よ び transplantation さ れ た マ ウ ス individual で ヶ 3 months, コ ン ト ロ ー ル cells に compare し て よ り maintain さ れ, whole て の system を の hematopoietic cells to construct し た. HES-1シグナ に に and <s:1> in vitro increase of hematopoietic stem cells に are useful for と examination えられた. Future は, Notch リ ガ ン ド に よ り HES1 の 発 induced が must now ら れ る こ と, お よ び, Notch リ ガ ン ド を with い て HES1 import と similar の fruit comes unseen が ら れ る こ と の 検 line card を う plan で あ る.

项目成果

Takayanagi,H.: "Suppression of arthritic bone destruction by adenovirus-mediated csk gene transfer to synoviocytes and osteoclasts."J.Clin.Invest. 104. 137-146 (1999)

Takayanagi,H.：“通过腺病毒介导的 csk 基因转移至滑膜细胞和破骨细胞来抑制关节炎骨质破坏。”J.Clin.Invest。

Shimizu,K.: "Binding of Delta1,Jagged1, and Jagged2 to Notch2 Rapidly Induces Cleavage, Nuclear Translocation, and Hyperphosphorylation of Notch2"Mol.Cell.Biol.. 20. 6913-6922 (1999)

Shimizu,K.：“Delta1、Jagged1 和 Jagged2 与 Notch2 的结合快速诱导 Notch2 的切割、核易位和过度磷酸化”Mol.Cell.Biol.. 20. 6913-6922 (1999)

Kurokawa,M.: "The Evi-l oncoprotein inhibits c-Jun N-terminal kinase and prevents stress-induced cell death."EMBO J.. 19. 2958-2968 (2000)

Kurokawa,M.：“Evi-1 癌蛋白抑制 c-Jun N 末端激酶并防止应激诱导的细胞死亡。”EMBO J.. 19. 2958-2968 (2000)

Shimizu K, Chiba S, Kumano K, Hosoya N, Takahashi T, Hamade Y, Yazaki Y, Hirai H: "Binding of Delta1, Jagged1, and Jagged2 to Notch2 rapidly induces cleavage, nuclear translocation and hyperphosphorylation of Notch2"Mol. Cell. Biol.. 20. 6913-6922 (2000)

Shimizu K、Chiba S、Kumano K、Hosoya N、Takahashi T、Hamade Y、Yazaki Y、Hirai H：“Delta1、Jagged1 和 Jagged2 与 Notch2 的结合快速诱导 Notch2 的裂解、核易位和过度磷酸化”Mol。

Miyazaki,T.: "In Vitro and In Vivo Suppression of Osteoclast Function by Adenovirus Vector-Induced csk Gene."Journal of Bone and Mineral Research. 15. 41-51 (2000)

Miyazaki,T.：“腺病毒载体诱导的 csk 基因对破骨细胞功能的体外和体内抑制。”骨与矿物质研究杂志。