造血器腫瘍に対するシグナル伝達分子を用いた次世代造血幹細胞増幅法の開発

利用造血肿瘤信号分子开发下一代造血干细胞扩增方法

• 批准号: 12217035
• 负责人: 高橋 宗春
• 金额: $ 3.14万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12217035/
• 关键词: 造血幹細胞; 体外増幅; アデノウイルス; Notch; AGM

造血幹細胞ヘシグナル伝達分子の遺伝子を導入・発現させて増幅を図る新しい方法の確立のため、本年度は導入するシグナル伝達物質の選択とそのシグナル伝達機構の主に血球分化抑制能からみた解析などを行った。1)導入するシグナル伝達物質の選択研究の目的に最適なシグナル伝達分子を選択するためのin vitroにおけるスクリーニング系として、1)ES細胞からの造血細胞の誘導、2)AGM領域由来の細胞からの造血細胞の誘導、の2系を確立した。これらを用いて様々なシグナル伝達分子を導入し、分化抑制能、増殖促進能などを比較した結果、ES細胞に活性化型Notch1を導入した場合、embryoid bodyから形成されるsecondary colonyは、再培養によりthird、fourth colonyを形成した。また、活性化型Notch1を発現するレトロウイルスを作成してAGM領域由来の細胞に導入すると混合コロニーが増加することが観察された。これらは活性化型Notch1の分化抑制シグナルが胎児造血でも成体造血でも有効であることを示している。2)Notchシグナルの造血分化抑制機構の解析Notchシグナルの造血系に対する分化抑制機構を転写因子の面から解析した。myeloid系、erythroid系転写因子について、正常細胞と活性化型Notch1発現細胞における分化刺激前後での遺伝子発現を比較した。その結果、GATA-2の発現が維持されていることから、Notch1による未熟性の維持が、GATA-2を介している可能性が示唆された。さらに、活性化型Notch1を発現した細胞にDominant negative GATAを発現させることにより、活性化型Notch1の分化抑制効果は消失した。以上より、Notchシグナルによる血液細胞の未熟性の維持には、GATA-2の発現の維持が必要であると考えられた。

Hematopoietic stem cell ヘ シ グ ナ ル 伝 operatives の posthumous son 伝 を import · 発 now さ せ て rights of を 図 る new し の い method established の た め, this year's は import す る シ グ ナ ル 伝 of material の sentaku と そ の シ グ ナ ル 伝 of institutions の main に blood cell differentiation can inhibit か ら み た parsing な ど を line っ た. 1) import す る シ グ ナ ル 伝 of material の purpose の sentaku study に optimum な シ グ ナ ル 伝 operatives を sentaku す る た め の in vitro に お け る ス ク リ ー ニ ン グ department と し て, 1) ES cells か ら の hematopoietic cells の induction, 2) AGM origin の か ら の の induced hematopoietic cells, 2 is の を establish し た. こ れ ら を with い て others 々 な シ グ ナ ル 伝 operatives を import し, differentiation can inhibit, raised colonization can promote な ど を compare し た results, ES cells に activeness Notch1 を import し た occasions, embryoid body か ら form さ れ る secondary colonyを, then cultivate によ によ third, fourth colonyを to form た た. ま た type, active Notch1 を 発 now す る レ ト ロ ウ イ ル ス を made し て AGM field origin の cells に import す る と mixed コ ロ ニ ー が raised plus す る こ と が 観 examine さ れ た. Type こ れ ら は activeness Notch1 の differentiation inhibiting シ グ ナ ル が tire where hematopoietic で も adult hematopoietic で も have sharper で あ る こ と を shown し て い る. 2) Notch シ グ ナ ル の hematopoietic differentiation institutions の Notch analytical シ グ ナ ル の hematopoietic system に す seaborne る differentiation inhibiting institutions を planning write factor の surface か ら parsing し た. Myeloid, erythroid planning write factor に つ い て, normal cells と activeness Notch1 発 now cells に お け る differentiation before and after stimulation で の heritage 伝 発 を now comparing し た. そ の results, GATA - 2 の 発 が now maintain さ れ て い る こ と か ら, Notch1 に よ る unripe の maintain が, GATA - 2 を interface し て い が る possibility in stopping さ れ た. Youdaoplaceholder0, activated Notch1を occurs in <s:1> た cells に, Dominant negative GATAを occurs in させる させる とによ とによ とによ を, the inhibitory effect of activated Notch1 on <s:1> differentiation さらに disappears in た. Above よ り, Notch シ グ ナ ル に よ る blood cells の unripe sex の maintain に は, GATA - 2 の 発 の now maintain が necessary で あ る と exam え ら れ た.

项目成果

Takayanagi,H.: "Suppression of arthritic bone destruction by adenovirus-mediated csk gene transfer to synoviocytes and osteoclasts."J.Clin.Invest. 104. 137-146 (1999)

Takayanagi,H.：“通过腺病毒介导的 csk 基因转移至滑膜细胞和破骨细胞来抑制关节炎骨质破坏。”J.Clin.Invest。

Shimizu,K.: "Binding of Deltal, Jagged1, and Jagged2 to Notch2 Rapidly Induces, Cleavage, Nuclear Translocation, and Hyperphosphorylation of Notch2"Mol.Cell.Biol.. 20. 6913-6922 (1999)

Shimizu,K.：“Delta、Jagged1 和 Jagged2 与 Notch2 的结合快速诱导 Notch2 的切割、核易位和过度磷酸化”Mol.Cell.Biol.. 20. 6913-6922 (1999)

Miyazaki,T.: "In Vitro and In Vivo Suppression of Osteoclast Function by Adenovirus Vector-Induced csk Gene."Journal of Bone and Mineral Research. 15. 41-51 (2000)

Miyazaki,T.：“腺病毒载体诱导的 csk 基因对破骨细胞功能的体外和体内抑制。”骨与矿物质研究杂志。

Kurokawa, M.: "The Evi-1 oncoprotein inhibits c-Jun N-terminal kinase and prevents stress-induced cell death."EMBO J. 19. 2958-2968 (2000)

Kurokawa, M.：“Evi-1 癌蛋白抑制 c-Jun N 末端激酶并防止应激诱导的细胞死亡。”EMBO J. 19. 2958-2968 (2000)

Shimizu K: "Mouse Jagged1 physically interacts with Notch2 and other Notch receptors : assessment by quantitative methods."J Biol Chem. 274. 32961-32969 (1999)

Shimizu K：“小鼠 Jagged1 与 Notch2 和其他 Notch 受体发生物理相互作用：通过定量方法进行评估。”J Biol Chem。