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The evolutionary origin of the vertebrate pharyngeal arches

脊椎动物咽弓的进化起源

基本信息

批准号：
22H02677
负责人：
高橋宗春
金额：
$ 10.98万
依托单位：
Tokyo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2026-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

本研究は、脊椎動物の咽頭弓発生に極めて重要なTbx1遺伝子のナメクジウオ相同遺伝子Tbx1/10に焦点をあて、ナメクジウオとゼブラフィッシュの遺伝子改変動物を作成することにより、ナメクジウオ鰓裂におけるTbx1/10の機能と発現制御メカニズムを精査することを目的としている。このうち本年度は発現制御解析に焦点を当て、Tbx1/10及びPitxレポータートランスジェニックゼブラフィッシュ（BfTbx1/10:Venus、BfPitx:Venus）の樹立をおこなった。既に先行研究でナメクジウオTbx1/10遺伝子の上流ゲノム領域をクローニングし、それを用いてVenusレポーター遺伝子を構築後ナメクジウオ胚に導入し、5.3kbのゲノム領域にはナメクジウオTbx1/10の発現を再現するのに十分なシス制御エレメント（CRE）が含まれていることを確認している。それに加えて、今後の頭部中胚葉の解析に必須な主要マーカー遺伝子であるPitx遺伝子の上流ゲノム領域もクローニングし、同様にVenusレポーター遺伝子を構築した。これらのレポーター遺伝子をゼブラフィッシュ受精卵にTol2遺伝子とともにマイクロインジェクトし、通常のプロトコールに従ってトランスジェニックゼブラフィッシュの樹立を試みた。まず体細胞系列にレポーター遺伝子が導入されたfounderをスクリーニングするため、PCRジェノタイピングを完了した。現在それらと野生型（ab）を交配して得られたF1初期発生胚を、Venusシグナルの部位と強度を指標に、選別をおこなっている段階である。現時点ではこれらVenusシグナルを詳細に解析・報告する段階ではないが、ゼブラフィッシュのtbx1やpitx2遺伝子発現に類似した頭部中胚葉での発現パターンが観察されており、今後の解析の基盤となるリソースが速やかに得られることが期待される。

This study is aimed to investigate the function of Tbx1/10 in vertebrate eustachial arch development, which is very important for vertebrate eustachial arch development, and the function of Tbx1/10 in vertebrate eustachial arch development. This year, the focus of the system analysis is on Tbx1/10 and Pitx 1/10 (BfTbx1/10:Venus, BfPitx:Venus). After the preliminary study on the upstream domain of the Tbx1/10 gene, the construction of the Venus gene, the introduction of the 5.3kb upstream domain, the reproduction of the Tbx1/10 gene, and the identification of the CRE (CRE), including the inclusion of the gene, were confirmed. For future analysis of the head mesoderm, it is necessary to construct the main vector of the Pitx vector. This is the first time that a child has been born. The gene of somatic cell series is introduced into the founder, and the PCR gene is completed. Now we have wild-type (ab) mating and F1 early embryo development, Venus, site and intensity indicators, and selection and classification. At present, Venus is analyzed in detail. The stage of the report is similar to that of the embryo in the head. The analysis of the base plate is expected in the future.