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慢性腎不全における高リン血症を抑制する新規リン代謝調節ホルモンの機能解析

抑制慢性肾功能衰竭高磷血症的新型磷代谢调节激素的功能分析

基本信息

批准号：
12770583
负责人：
森田恭子
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770583/
关键词：
高リン血症リン利尿因子スタニオカルシン FGF23

项目摘要

長期透析における合併症対策は、患者のQOLを左右する重要な問題である。透析時の高リン血症への対策を図るため、腸管および腎臓におけるリン(再)吸収抑制因子の検索が行われ、低リン血症を引き起こす未同定の液性因子phosphatoninが注目された。最近、ポジショナルクローニングより常染色体優性遺伝性低リン血性くる病(ADHR)の原因遺伝子としてFGF23が同定され、同様に低リン血症を呈する腫瘍性骨軟化症の責任腫瘍からも過剰分泌されていることが証明された。そこで、本研究ではHemangiopericytoma患者の摘出腫瘍からFGF23 cDNAをクローニングし、pCIneo発現ベクターに組み込んだ。FGF23をCHO-K1細胞にトランスフェクションし、その培養上清を濃縮しウェスタンブロット法にてその分泌を確認した。さらにこの培養上清をブタ腎臓近位尿細管細胞株LLC-PK1細胞に添加し、24時間培養後total RNAを抽出しRT-PCR解析にてNPT2の発現を検討した。その結果、FGF23によってNPT2の発現は抑制され、先に我々が同定したSTC2とほぼ同程度の抑制効果を示した。また、ADHR患者の変異部位である176番目に変異を導入したFGF23変異体をmutagenesisによって作製し、CHO-K1細胞にトランスフェクションした。この培養上清をLLC-PK1細胞に添加し、同様にNPT2の発現を検討した。その結果、FGF23変異体はSTC2およびFGF23と比較して有意にNPT2の発現を抑制した。最近、FGF23の176-180番目に存在するRXXRモチーフがプロテアーゼ消化をうけることが示唆され、NPT2の発現低下すなわち低リンの誘導には、プロテアーゼによる修飾を受けないFdF23変異体が効果的である可能性が示唆された。今後この変異体をGSTとの融合蛋白として発現させ、5/6腎摘ラットへ投与し、腎不全時の高リン血症予防効果について検討する予定である。

Important questions about the management of complications and the patient's QOL during long-term dialysis During dialysis, the management of hyperthyroidism, intestinal and renal diseases,(re) absorption inhibitor gene expression, hypothyroidism, and an unregulated fluid factor, phosphatin, were noted. Recently, it has been proved that the cause of autosomal dominant hereditary hypochondriasis (ADHR) is due to the presence of FGF23 and hypochondriasis. In this study, FGF23 cDNA was extracted from patients with Hemangiopericytoma and pCIneo was detected. FGF23 was isolated from CHO-K1 cells and purified from culture supernatant. To investigate the expression of NTP2, total RNA was extracted from LLC-PK1 cells cultured for 24 hours. As a result, the occurrence of FGF23 and NPT2 was suppressed, and the initial results were consistent with STC2 and the suppression effect was demonstrated. The mutation of FGF23 was induced in CHO-K1 cells. The culture supernatant was added to LLC-PK1 cells and the development of NPT2 was discussed. As a result, FGF23 is different from STC2 and FGF23, and the occurrence of NPT2 is suppressed intentionally. Recently, the existence of RXXR in FGF23 and its 176-180 segments has been demonstrated, and the occurrence of NPT2 has been demonstrated. In the future, the fusion protein of GST and 5/6 kidney failure will be detected and discussed.