血中濃度調節ホルモン(Phosphatonin)の発現クローニング

血药浓度调节激素（磷酸钙）的表达克隆

• 批准号: 09770788
• 负责人: 森田 恭子
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770788/
• 关键词: XLH; リン輸送担体; ファスファトニン; PHEX; Stanniocalcin2; ルシフェラーゼアッセイ; フォスファトニン; PEX

伴性低リン血性ビタミンD抵抗性クル病(XLH)は、腎近位尿細管におけるリンの再吸収障害により、著しい低リン血症を呈する。このリン再吸収障害機構に関して、新たなリン再吸収抑制因子(フォスファトニン)の関与が示唆されているが、未だ同定されていない。一方、XLHの原因遺伝子としてPHEXが同定され、PHEX蛋白は、フォスファトニンの分泌に関わるプロセシング酵素と考えられている。これらの相互関係からXLHは、新しいリン調節ホルモンを解明する大きな手がかりと想定される。そこで、本研究では新たなリン調節ホルモン(フォスファトニン)の同定を目的とし、ヒトNa依存性リン輸送担体(NaPi-3)遺伝子の転写開始点上流2.4kbをルシフェラーゼ遺伝子をもつリポーターベクターに連結し、腎尿細管由来のOK細胞にトランスフェクションした(OK-B2400細胞)。その後48時間正常およびXLH患者血清存在下で培養した後、細胞を回収し、ルシフェラーゼ活性をルミノメーターにて測定した。血清5%添加では、有意差が認められなかったが、20%まで増加させると明らかにXLH患者血清でルシフェラーゼ活性が抑制された。また一方、硬骨魚類のカルシウム調節ホルモンとして知られるStanniocalcin(STC)のホモログであるStanniocalcin2(STC2)のcDNAをクローニングした。STCは腎におけるリンの再吸収を促進することから、STC2がリン再吸収を抑制する因子である可能性を考え、STC2をpMAM2-BSD発現ベクターを用い、COS-7細胞でデキサメサゾン存在下で培養させた。STC2は細胞外に分泌されると考えられるので、発現させたときの培養上清をOK-B2400細胞に添加し、NaPi-3プロモーター活性に対する効果をルシフェラーゼ法で検討した。その結果、STC2は、STCとは異なりリン輸送担体遺伝子発現を抑制し、リン輸送活性を減少させた(Ishibashi,K.,B.B.R.C.,1998)。STC2が、フォスファトニンである可能性については、今後検討する必要が考えられる。

Sex low リ ン hemorrhagic ビ タ ミ ン D resistance ク ル disease (XLH) は, renal proximal tubule urine に お け る リ ン の take 収 handicap of に よ り, the し い low リ ン hematic disease を show す る. こ の リ ン take 収 handicap of institutions に masato し て, new た な リ ン take 収 inhibitory factor (フ ォ ス フ ァ ト ニ ン) の masato and が in stopping さ れ て い る が, not だ with さ れ て い な い. Cause of one party, XLH の survived 伝 と し て PHEX が with fixed さ れ, PHEX protein は, フ ォ ス フ ァ ト ニ ン の secretion に masato わ る プ ロ セ シ ン グ enzyme と exam え ら れ て い る. こ れ ら の masato is mutually か ら XLH は, new し い リ ン adjust ホ ル モ ン を interpret す る big き な hand が か り と scenarios さ れ る. そ こ で, this study で は new た な リ ン adjust ホ ル モ ン (フ ォ ス フ ァ ト ニ ン) with fixed の を purpose と し, ヒ ト Na dependency リ ン conveying supporter (for a - 3) posthumous son 伝 の planning write starting point for high 2.4 KB を ル シ フ ェ ラ ー ゼ posthumous son 伝 を も つ リ ポ ー タ ー ベ ク タ ー に link し urine, kidney tubule origin の OK cells に ト ラ ン ス Youdaoplaceholder0 ショ ショ ショ た た(OK-B2400 cells). 48 normal time after そ の お よ び XLH patients serum in the presence of で cultivate し た, cell を 収 back after し, ル シ フ ェ ラ ー ゼ active を ル ミ ノ メ ー タ ー に て determination し た. Serum 5% add で は, deliberately bad が め ら れ な か っ た が, 20% ま で raised plus さ せ る と Ming ら か に XLH patients serum で ル シ フ ェ ラ ー ゼ inhibition さ が れ た. ま た side, bony fishes の カ ル シ ウ ム adjust ホ ル モ ン と し て know ら れ る Stanniocalcin の on STC ホ モ ロ グ で あ る Stanniocalcin2 (STC2) の cDNA を ク ロ ー ニ ン グ し た. On STC は renal に お け る リ ン の take 収 を promote す る こ と か ら, STC2 が リ ン take 収 を inhibit す る factor で あ る possibility を え test, STC2 を pMAM2 - BSD 発 now ベ ク タ ー を い, COS 7 cells で デ キ サ メ サ ゾ ン で cultivation in the presence of さ せ た. STC2 は secretion of extracellular に さ れ る と exam え ら れ る の で, 発 さ せ た と き の culture supernatant を OK に add し B2400 cells, for a 3 プ ロ モ ー タ ー active に す seaborne る unseen fruit を ル シ フ ェ ラ ー ゼ method で beg し 検 た. Hold そ の results, STC2 は, STC と は different な り リ ン conveying supporter heritage 伝 発 を inhibit し now, リ ン reducing conveying active を さ せ た (Ishibashi, k., B.B.R.C., 1998). STC2 が, フ ォ ス フ ァ ト ニ ン で あ る possibility に つ い て は, future beg す 検 る が necessary test え ら れ る.

项目成果

Taketani,Y.: "Characterization of the 5' flanking region of the human NPT-1 Na/Phosphate cotransporter gene." Biochium.Biophys.Acta. 1396. 267-272 (1998)

Taketani,Y.：“人类 NPT-1 Na/磷酸盐协同转运蛋白基因 5 侧翼区域的表征。”

Morita,K.: "Effect of dietary phosphate on Na-dependent phosphate contrasporters function and expression in the rat kidney." Clin.Exp.Nephrol.2. 109-116 (1998)

Morita,K.：“膳食磷酸盐对大鼠肾脏中钠依赖性磷酸盐转运蛋白功能和表达的影响。”

Morita,K.: "Dietary regulation of renal phosphate transporters in hypophosphatemic mice." J.Bone Miner.Metab.16・4. 234-240 (1998)

Morita, K.：“低磷血症小鼠肾脏磷酸盐转运蛋白的饮食调节。”J.Bone Miner.Metab.16·4（1998）。

武田英二: "伴性家族性低リン血性ビタミンD抵抗性くる病の病因病態に関する分子機構" 日本先天代謝異常学会誌. 13・2. 223-228 (1997)

Eiji Takeda：“性相关家族性低磷酸盐维生素 D 抵抗性佝偻病发病机制的分子机制”，日本遗传代谢紊乱学会杂志 13・2（1997 年）。

Taketani,Y.: "Regulation of Type II Renal Na-dependent inorganic phosphate transporters by 1.25-dihydroxyvitamin D3." J.Biol.Chem.273・23. 14575-14581 (1998)

Taketani, Y.：“1.25-二羟基维生素 D3 对 II 型肾钠依赖性无机磷酸盐转运蛋白的调节”。J.Biol.Chem.273·23（1998）。