バセドウ病におけるTSH受容体上のTリンパ球エピトープの同定

格雷夫斯病 TSH 受体上 T 淋巴细胞表位的鉴定

• 批准号: 12770624
• 负责人: 澤井 喜邦
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Fujita Health University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770624/
• 关键词: バセドウ病; TSH受容体; Tリンパ球; HLA-DR3

筆者らは以前に、ヒトTSH受容体細胞外領域に相応した一連の合成ペプチドを用いて白人のバセドウ病患者におけるTSH受容体上のTリンパ球エピトープがアミノ酸158-176,207-222,343-362/357-376であることを報告した。また筆者は、白人においてバセドウ病の危険因子であると考えられているHLA-DR3分子を精製し、HLA-DR3分子とヒトTSH受容体合成ペプチドの結合を調べ、HLA-DR3分子がTリンパ球のレパートリー形成に与える影響を介してバセドウ病への罹患危険性を高めている可能性を報告した。今回の研究は、抗原提示細胞がHLA-DR3分子上に実際に提示している(naturally processed)ヒトTSH受容体ペプチドを同定する目的で行なっている。1)ヒトTSH受容体細胞外領域をコードするcDNAを哺乳類細胞発現ベクターであるpTARGET^<TM> expression vector(Promega)に組み込んだ。2)QBL細胞(EBウイルスにより形質変換したBリンパ球ライン,HLA-DR3をホモに発現する)にElectroporation法(EQUBIO Easyject Optima ET-003を使用)にてpTARGET^<TM> vector/ヒトTSH受容体cDNAを導入した。3)抗DR抗体L243(ATCC)を用いたアフィニティカラムにて、ヒトTSH受容体cDNAを導入したQBL細胞からDR3-抗原ペプチド複合体を精製した。4)DR3-抗原ペプチド複合体をpH2.0にてインキュベートして抗原ペプチドをDR3から解離させ、フィルターにてDR3から分離した。以下は現在進行中。5)分離した抗原ペプチドのアミノ酸配列決定

The author reports that the TSH receptor in the extracellular domain of white people and white patients with TSH disease has been continuously synthesized in the presence of TSH receptors 158- 176, 207 - 222, 343 -362/357-376. The authors report on the purification of HLA-DR3 molecules, the regulation of binding of HLA-DR3 molecules to TSH receptor synthesis, the influence of HLA-DR3 molecules on the formation of TSH receptor, and the possibility of high risk of developing TSH. The present study aims to identify HLA-DR3 receptors that are naturally processed by antigen signaling cells. 1) TSH receptor extracellular domain cDNA <TM>expression vector(Promega) in mammalian cells 2) pTARGET^ vector/TSH receptor cDNA was introduced into QBL cells by Electroporation method (EQUBIO Easyject Optima ET-003 was used)(EB cells were transformed into B cells and HLA-DR3 was detected)<TM>. 3)Anti-DR antibody L243(ATCC) was introduced into QBL cells and purified from DR3-antigen receptor complex using cDNA from TSH receptor. 4) DR3-antigen complex is isolated at pH2.0. The following is in progress. 5) Isolation of antigens and determination of acid alignment

项目成果

Kouki, T., Sawai, Y.et al.: "CTLA-4 gene polymorphism at position 49 in exon 1 reduces the inhibitory function of CTLA-4 and contributes to the pathogenesis of Graves' disease"J Immunol.. 165(11). 6606-6611 (2000)

Kouki, T., Sawai, Y.等人：“CTLA-4 基因第 1 号外显子第 49 位的多态性降低了 CTLA-4 的抑制功能，并导致 Graves 病的发病机制”J Nutrition.. 165(11)

Sawai,Y,L.J.DeGroot.: "Binding of human TSH receptor peptides to a Graves' disease-predisposing HLA class II moiocule."J Clin Endocrinol and Metab. 85(3). 1176-1179 (2000)

Sawai,Y,L.J.DeGroot.：“人 TSH 受体肽与格雷夫斯病易感性 HLA II 类分子的结合。”J Clin Endocrinol and Metab。

Sawai, Y., L.J.DeGroot: "Binding of human TSH receptor peptides to a Graves' disease-predisposing HLA class II molecule"J Clin Endocrinol and Metab. 85(3). 1176-1179 (2000)

Sawai，Y.，L.J.DeGroot：“人 TSH 受体肽与格雷夫斯病易感性 HLA II 类分子的结合”J Clin Endocrinol and Metab。

Kouki,T.,Sawai,Y.et al: "CTLA-4 gene polymorphism at position 49 in exon 1 reduces the inhibitory function of CTLA-4 and contributes to the pathogenesis of Graves' disease."J Immunol.. 165(11). 6606-6611 (2000)

Kouki,T.,Sawai,Y.等人：“CTLA-4 基因第 1 号外显子第 49 位的多态性降低了 CTLA-4 的抑制功能，并导致 Graves 病的发病机制。”J Nutrition.. 165(11)