脳下垂体腺腫におけるホルモンの開口分泌を制御する因子に関する基礎的研究-特にNSF-SNAP-SNARE systemの関与について-

垂体腺瘤激素胞吐控制因素的基础研究——特别是NSF-SNAP-SNARE系统的参与——

基本信息

批准号：
12770771
负责人：
田原重志
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Nippon Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770771/
关键词：
Pituitary Pituitary adenoma NSF-SNAP-SNARE Human Exocytosis Immunohistochemistry RT-PCR

项目摘要

下垂体細胞・腺腫における分泌顆粒の細胞内輸送を調節する因子として、Rab3 isoformとNSF-SNAP-SNARE系蛋白が知られているが、前者の細胞内局在については、我々がMod Pathol 12,627-34,1999.にすでに報告している。今回平成12〜13年度には後者のNSF-SNAP-SNARE系蛋白、特にvesicle SNAREであるsynaptobrevin/VAMP(vesicle-associated membrane protein)に注目し、手術によって得られた下垂体腺腫サンプルを対象として、NSF-SNAP-SNARE系の発現を免疫組織学的手法を用いて検討した。対象となる腺腫は4%paraformaldehydeにて固定し、パラフィン切片とした。使用した抗体は抗VAMP-1抗体(santa Curlz社)であり、ABC法にて免疫染色を行った。結果としては、下垂体腺腫に広くVAMP-1の発現が観察されたが、特にGH産生腺腫(Ghoma)の89%に高率に陽性を示した。さらにGhomaにおいては陽性細胞の比率が高く、また細胞内局在においても細胞膜周囲のみならず、細胞質にも強く発現していた。平成13年度は、VAMP-1の細胞内局在を確認するために、下垂体腺腫サンプルを使用し、免疫電顕を施行した。方法はprotein A goldを用いたpost embedding法を選択したが、VAMP-1は分泌顆粒の特に限界膜近傍での発現が観察された。これはRab3蛋白の局在と同様であり、synaptobrevin/VAMPは分泌顆粒を介してのホルモン分泌制御に関与していることが示唆された。これは、一般的に分泌顆粒の多い、Ghomaに高率に発現していることからも納得できる結果と思われる。

Rab3同工型和NSF-SNAP-SNARE蛋白是垂体细胞和腺瘤中分泌颗粒的细胞内转运的因素，但我们已经报道了前者在Mod Pathol 12,627-34,1999中的亚细胞定位。在2000年至2001年，我们专注于后者的NSF-SNAP-SNARE蛋白，尤其是囊泡SNARE Synaptobrevin/VAMP（囊泡相关膜蛋白），并使用免疫组织化学技术检查了在佩特西特式depitiity eDeity eDeity eDeity eDeity eDeity samples中的NSF-SNAP-SNARE系统的表达。感兴趣的腺瘤固定在4％的多聚甲醛和石蜡中。使用的抗体是抗VAMP-1抗体（Santa Curlz），并使用ABC方法进行免疫染色。结果，在垂体腺瘤中广泛观察到VAMP-1的表达，但是在89％的产生GH的腺瘤（Ghoma）中，高阳性结果尤其阳性。此外，阳性细胞的比例在Ghoma中较高，即使在亚细胞定位中，它不仅在细胞膜周围，而且在细胞质中也得到了强烈的表达。在2001年，使用垂体腺瘤样品确认VAMP-1的亚细胞定位和免疫电子显微镜。选择了使用蛋白A金的嵌入方法作为该方法，但观察到VAMP-1在分泌颗粒中表达，尤其是在极限膜附近。这类似于Rab3蛋白的定位，这表明突触纤维/VAMP与分泌颗粒有关激素分泌的调节。这是一个令人信服的结果，因为它通常在Ghoma中表达，该结果丰富了分泌的颗粒。