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脳下垂体腺腫におけるホルモンの開口分泌を制御する因子に関する基礎的研究-特にNSF-SNAP-SNARE systemの関与について-

垂体腺瘤激素胞吐控制因素的基础研究——特别是NSF-SNAP-SNARE系统的参与——

基本信息

批准号：
12770771
负责人：
田原重志
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Nippon Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770771/
关键词：
Pituitary Pituitary adenoma NSF-SNAP-SNARE Human Exocytosis Immunohistochemistry RT-PCR

项目摘要

下垂体細胞・腺腫における分泌顆粒の細胞内輸送を調節する因子として、Rab3 isoformとNSF-SNAP-SNARE系蛋白が知られているが、前者の細胞内局在については、我々がMod Pathol 12,627-34,1999.にすでに報告している。今回平成12〜13年度には後者のNSF-SNAP-SNARE系蛋白、特にvesicle SNAREであるsynaptobrevin/VAMP(vesicle-associated membrane protein)に注目し、手術によって得られた下垂体腺腫サンプルを対象として、NSF-SNAP-SNARE系の発現を免疫組織学的手法を用いて検討した。対象となる腺腫は4%paraformaldehydeにて固定し、パラフィン切片とした。使用した抗体は抗VAMP-1抗体(santa Curlz社)であり、ABC法にて免疫染色を行った。結果としては、下垂体腺腫に広くVAMP-1の発現が観察されたが、特にGH産生腺腫(Ghoma)の89%に高率に陽性を示した。さらにGhomaにおいては陽性細胞の比率が高く、また細胞内局在においても細胞膜周囲のみならず、細胞質にも強く発現していた。平成13年度は、VAMP-1の細胞内局在を確認するために、下垂体腺腫サンプルを使用し、免疫電顕を施行した。方法はprotein A goldを用いたpost embedding法を選択したが、VAMP-1は分泌顆粒の特に限界膜近傍での発現が観察された。これはRab3蛋白の局在と同様であり、synaptobrevin/VAMPは分泌顆粒を介してのホルモン分泌制御に関与していることが示唆された。これは、一般的に分泌顆粒の多い、Ghomaに高率に発現していることからも納得できる結果と思われる。

Factors regulating intracellular transport of secretory granules in hypophysis cells and adenoids, Rab3 isoform and NSF-SNAP-SNARE family proteins are known, and the intracellular regulation of the former is reported in Mod Pathol 12, 627 - 34, 1999. In 2012 and 2013, the NSF-SNAP-SNARE system protein, especially the vesicle SNARE system, synaptobrevin/VAMP(vesicle-associated membrane protein), was focused on, and the immunohistochemical methods for the development of NSF-SNAP-SNARE system were discussed. For example, 4% paraformaldehyde was used to fix the swelling, and the swelling was removed from the tissue. Immunostaining was performed using antibodies against VAMP-1 (santa Curlz). Results: The expression of VAMP-1 in pituitary gland was detected in 89% of cases. The percentage of positive cells in Ghoma increased, and the intracellular structure increased. In 2013, VAMP-1 was confirmed to be intracellular, and the pituitary gland was used to immunize. Methods A gold protein was selected by post embedding method, and VAMP-1 was detected near the secretory membrane. The Rab3 protein is expressed in the same way as the synaptobrevin/VAMP secretory granule. A high percentage of secreting granules and Ghoma occur.