ラットの海馬初代培養細胞の樹状突起スパインにおける麻酔薬の作用

麻醉药对原代培养大鼠海马细胞树突棘的影响

• 批准号: 12770819
• 负责人: 玉田 昌子
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770819/
• 关键词: 麻酔薬; PC12細胞; 成長円錐; アクチン

本校の細胞内カルシウム測定装置のメンテナンスがなされておらず使用できなかったことと、ラットの海馬の錘体細胞の初代培養のテクニックが当初なかったことより、まず始めにラットの褐色細胞腫PC12細胞をNGFで分化させたときに伸びてくる神経突起の先端に存在する成長円錐のアクチン繊維による形態変化、filopodia、lamellipodiaに麻酔薬が与える影響を調べることから、実験を開始した。PC12細胞はDMEMに10%馬血清と5%牛胎児血清を加えたもので維持し、実験を行う時には、poly-l-lysineでコートしたスライドガラス上に移し、分化を誘導するには培養液の血清を2.5%馬血清のみに減らしたものにNGFを50ng/mlの濃度で加えたものを一日置きに入れ替えることによって行った。7日たって十分に分化したところで培養液にイソフルレンをPBSに飽和させたものを0.3mMになるように加え、5分たったところで4%ホルムアルデヒドで固定し、rhodamine-labeled phalloidinで染色し蛍光顕微鏡および共焦点レーザー顕微鏡で観察した。イソフルレンを加えた細胞では、コントロールに比べfilopodiaが短縮した細胞が多い傾向がみられた。今後生細胞で経時的に形態の変化を観察、記録する系を確立し今回の結果を確認するとともに、当初の目的である海馬の錘体細胞の初代培養細胞の樹上突起スパインにおける麻酔薬の効果に実験をすすめる予定である。

Our intracellular cell culture assay device is used to measure the growth and differentiation of PC12 cells in the primary culture of hippocampal neurons. The morphological changes of PC12 cells in the primary culture of hippocampal neurons are described as filopodia. Lamellipodia is the first time that we've had a chance to talk to each other. PC12 cells were cultured in DMEM medium with 10% equine serum and 5% fetal bovine serum. The concentration of NGF was increased to 50ng/ml when the cells were cultured in DMEM medium. 7 days later, the culture medium was saturated with 0.3 mM PBS, 5 minutes later, 4% of the culture medium was fixed, rhodamine-labeled phalloidin was stained, and the confocal microscope was observed. In addition, the number of cells in the cell is larger than that in the cell. To observe and record the morphological changes of the embryonic cells and confirm the results of the present study.