权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

内リンパ嚢の機能解析による難聴・めまいのチャンネルレセプター病の原因同定

通过内淋巴囊的功能分析识别导致听力损失和眩晕的通道受体疾病的原因

基本信息

批准号：
12770942
负责人：
須納瀬弘
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

内リンパ嚢上皮管腔側の機能を電気生理学的に解析することを目的として、砂ねずみ内リンパ嚢のイオンチャンネル電流の測定をパッチクランプ法を用いて行った。単離は実体顕微鏡下にリン酸緩衝液を用いた外リンパ液類似組成を持つ溶液中で行い、管腔側膜を上にして還流槽中に固定後、この膜にパッチクランプ電極を当て、on-cell modeで電流を記録した。外リンパ液類似の組成を持つNaClを主体とした電極液を用いた記録では管腔側膜には直線的電流-電圧関係を持った、約27pSのチャンネル電流が記録された。これをinside-out modeにして細胞質側のイオン組成がNaClを主体とする細胞外液となった場合と、KCl主体とした溶液に置換した場合、あるいはグルコン酸ナトリウムとした場合で電流-電圧曲線に変化はなかった。しかし陽イオンをNMDGで置換すると外向き電流は消失し、このチャンネルがこれまで血管条辺縁細胞や前庭暗細胞の管腔側膜に存在が報告されているものと同様のコンダクタンスを持つ非選択的陽イオンチャンネルであることが判明した。管腔側のCa濃度をEGTAで減少させるとチャンネルの開確率は低下し、これまで内耳内の他細胞で報告されているような細胞内カルシウム濃度依存性があることが判った。細胞内cAMPを増加させることによる直接的影響、またはプロテインキナーゼA系の活性化の影響を調べるために、on-cell modeで細胞外液にdibutiryl-cAMPを添加したが、このイオンチャンネルの活性に明らかな影響は見られなかった。また、プロテインキナーゼC系の影響を見るためにフォルボルエステル(PMA)を細胞外液に添加したが、やはり活性の変化は明らかではなかった。

The function of the inner lumen of the epithelium is analyzed by electrophysiology. The purpose of the analysis is to measure the inner lumen of the epithelium by electrophysiology. In vitro microscopical analysis of the acid buffer solution in the presence of a similar composition in the solution, the lumen side membrane in the upper part of the cell, the fixed membrane in the electrode in the on-cell mode, the current recording The current-voltage relationship of the lumen side membrane was recorded in the same way as the current-voltage relationship of the lumen side membrane, about 27pS. In this case, the main body of the extracellular solution is NaCl, and the main body of the extracellular solution is KCl. The outward current disappears and the outward current occurs in the NMDG. The presence of the luminal lateral membrane of the vascular striated cells and vestibular dark cells is reported in the same way as the presence of the non-selective positive current. Ca concentration in the lumen side decreased, and the accuracy of cell growth decreased. In addition, other cells in the inner ear reported that Ca concentration in the intracellular cell depended on the concentration of Ca. The increase of intracellular cAMP directly affects the activation of the A system, and the increase of intracellular cAMP in on-cell mode affects the activation of the A system. The effect of PMA on the extracellular fluid was studied.