放射線照射による初期細胞応答反応におけるNBSI,ATMの相互作用の解析

NBSI与ATM在早期细胞辐射响应反应中的相互作用分析

基本信息

批准号：
12780407
负责人：
小林純也
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12780407/
关键词：
NBS1 ATM p53 放射線 DNA損傷 DNA修復

项目摘要

本年度は、放射線高感受性遺伝病ナイミーヘン染色体不安定症候群(NBS)原因遺伝子NBS1と毛細血管拡張性運動失調症(AT)原因遺伝子ATMとの放射線照射によるDNA損傷発生後のDNA修復に至る機構における機能的相関を明らかにすることを目的として研究を行った。前年度研究で、NBS由来リンパ芽球様細胞ではDNA損傷(二重鎖切断)発生後のATM関連経路の活性化に異常が見られたことから、NBS1がATMの活性化に機能することが明らかにされていた。しかし、本年度研究ではAT細胞では放射線照射後のNBS1のリン酸化及び、NBS1のフォーカス形成に異常があることを明らかにした。このことから、NBS1がATMの活性化に関与するだけでなく、ATMがNBS1をリン酸化することにより、NBS1の機能を制御することが示唆された。また、ATMとNBS1は複合体を形成していることが免疫沈降法から示され、この複合体形成はDNA二重鎖切断損傷発生後には増加していた。ATMはin vitroでp53を基質としてタンパク質リン酸化活性を測定することができるが、あらかじめ抗体によりNBS1を除去してからATMの活性を測定すると活性は通常時より低下していた。また、活性測定時にN末端領域を欠く変異型NBS1タンパク質を添加すると、ATM活性を著しく低下させた。これらの結果から、NBS1はATMと結合することにより、ATMの活性の制御に機能することが示唆される。以上から、NBS1とATMは互いの機能を制御し合うことにより、DNA二重鎖切断損傷発生時のDNA修復を含めた細胞応答に機能することが考えられる。

今年，我们进行了一项研究，目的是阐明由辐射敏感的遗传疾病，NBS1引起的基因NBS1与由辐射引起DNA后DNA修复的机制引起的基因NBS1与辐射损伤导致DNA修复的机制引起的基因ATM之间的功能相关性。上一年的研究表明，NBS1在ATM激活中起作用，因为在DNA损伤后与ATM相关途径的激活中观察到异常（双链断裂）。然而，今年的研究表明，在辐射后，细胞在NBS1的磷酸化和NBS1中焦点的形成方面具有异常。这表明NBS1不仅参与ATM激活，而且ATM磷酸化NBS1，从而调节NBS1功能。此外，免疫沉淀表明ATM和NBS1形成复杂，并且在DNA双链破裂损伤发生后增加了这种复合物的形成。 ATM可以使用p53作为底物在体外测量蛋白质磷酸化活性，但是当用抗体提前去除NBS1并测量ATM活性时，该活性低于正常。此外，当在活性测量过程中添加缺乏N末端区域的突变体NBS1蛋白时，ATM活性大大降低。这些结果表明，NBS1通过与ATM结合来调节ATM活性。从上面可以看出，通过控制彼此的功能，当发生DNA双链破裂时，包括DNA修复的细胞响应中的NBS1和ATM功能。