新規ジアジリン化脂肪酸誘導体による光反応性基導入法の比較検討

使用新型二氮丙啶脂肪酸衍生物引入光反应基团方法的比较研究

• 批准号: 12780433
• 负责人: 橋本 誠
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12780433/
• 关键词: 光アフィニティーラベル; 結合部位解析; ジアジリン; アビジン-ビオチン系; 脂肪酸; 糖脂質; セラミダーゼ; 抗体-抗原反応

Sphigolipid ceramide N-deacylaseは糖脂質の脂質部分を認識し長鎖塩基と脂肪酸に分解する酵素であり、その疎水部分の認識メカニズムは、非常に興味深い。申請者は、昨年度この酵素の機能解析用試薬の開発として、フェノール性水酸基のアルキル化を鍵反応とした、同一条件により種々の炭素鎖が導入できる光反応性脂肪酸誘導体の合成法を確立した。この方法では酸素原子が脂肪酸末端部分に入ってしまうことから、今年度は、酸素原子を介さない導入法検討を行った。大量合成(0.5モルスケール)可能な光反応性基ジアジリンのベンゼン環上に直接Friedel-Craftアシル化を行い、生成したアリールケトンの還元を種々の試薬を用いて検討したところ、トリエチルシランートリフルオロ酢酸系による還元で酸素原子を介さない新規光反応性脂肪酸誘導体の合成に成功した。光反応性ジアジリン誘導体においてカルボニル基の炭化水素への還元の成功は初めての例である。また、昨年合成に成功した光反応性ビオチン化セラミドをSphigolipid ceramide N-deacylaseの光アフィニティーラベルに適用した。その結果光照射により標的蛋白質へのビオチン化に成功し、天然基質であるガングリオシドの存在により阻害された。このことから、この試薬が酵素活性中心に天然基質と同様に特異的な認識をうけていることが明かとなった。このラベル蛋白の酵素消化を行い断片化することで8000前後のペプチドへとすることができた。

Sphigolipid ceramide N-deacylase is an enzyme that recognizes the lipid portion of sugar lipids and fatty acids. The applicant has established a method for the synthesis of photoreactive fatty acid inducers under the same conditions for the development of a functional assay for the enzyme of the previous year. The method of introducing acid atoms into the terminal part of fatty acids is discussed. A large number of synthesis (0.5 ° C) of photoreactive fatty acid inducer was successfully carried out by direct Friedel-Craft reaction on the ring to form photoreactive fatty acid inducer. The optical reflectivity of the carbon atoms induced by the reaction of the carbon atoms in the first phase of the reaction was investigated. In the past year, the synthesis of Sphigolipid ceramide N-deacylase has been successfully carried out. As a result, light irradiation of the target protein was successful, and the presence of natural matrix was inhibited. The enzyme activity center, the natural substrate, and the specific enzyme activity center The enzyme digestion of this protein is fragmented before and after 8000.

项目成果

M.Hashimoto, Y.Hatanaka, K.Nabeta: "Versatile synthesis of phenoxydiazirine based fatty acid analogues and photoreactive galactosylceramide"Bioorganic Medicinal Chemistry Letters. 12. 89-91 (2002)

M.Hashimoto、Y.Hatanaka、K.Nabeta：“基于苯氧基二氮嗪的脂肪酸类似物和光反应性半乳糖神经酰胺的多功能合成”生物有机药物化学快报。

M.Hashimoto, et al: "Cell-surface recognition of biotinylated membrane proteins requires very long spacer arms : An example from GLUT4 probes."ChemBioChem. 2. 52-59 (2001)

M.Hashimoto 等人：“生物素化膜蛋白的细胞表面识别需要非常长的间隔臂：GLUT4 探针的一个例子。”ChemBioChem。

A.K.Gillingham, et al: "Membrane transport : A practical approach"Oxford University Press. 13 (2000)

A.K.Gillingham 等人：“膜运输：一种实用方法”牛津大学出版社。

Y.Hatanaka, M.Ishiguro, M.Hashimoto, L.N.Gastinel, K.Nakagomi: "A model of photoprobe docking with β1,4-galactosyltransferase identify a possible carboxylate involved in glycosylation steps"Bioorganic Medicinal Chemistry Letters. 11. 411-413 (2001)

Y.Hatanaka、M.Ishiguro、M.Hashimoto、L.N.Gstinel、K.Nakagomi：“光探针与 β1,4-半乳糖基转移酶对接的模型识别了糖基化步骤中可能涉及的羧酸盐”《生物有机药物化学快报》11. 411-413。 (2001)

M.Hashimoto, Y.Hatanaka, J.Yang, J.Dhesi, G.D.Holman: "Bis (D-glucose) derivatives for glucose transporter photoaffinity labelling"Carbohydrate Reserch. 331. 119-127 (2001)

M.Hashimoto、Y.Hatanaka、J.Yang、J.Dhesi、G.D.Holman：“用于葡萄糖转运蛋白光亲和标记的双（D-葡萄糖）衍生物”碳水化合物研究。