ヒト脳δ型オピオイド受容体サブタイプのcDNAクローニングとリガンド結合部位解析

人脑δ阿片受体亚型的cDNA克隆和配体结合位点分析

• 批准号: 07680653
• 负责人: 下東 康幸
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07680653/
• 关键词: オピオイド受容体; 受容体サブタイプ; cDNAクローニング; エンケファリン

オピオイド受容体δ型にはサブタイプがあり、受容体間クロストークによりμ型をアロステリックに制御すると言われている。我々は最近、立体制約アミノ酸、(2R,3S)-E-シクロプロピルフェニルアラニン(∇Phe)を含むエンケファリン誘導体CP-OHがこのδ型サブタイプを識別・認識できる化合物であることを示した。本研究の目的は、このサブタイプをヒト脳cDNAライブラリーからスクリーニングして、一次構造を解析し、特異リガンドCP-OHの結合部位を解析することである。まず、ヒト脳δ、μ、κ型オピオイド受容体の塩基配列の比較からδ型にのみ存在する配列部分をプライマーとして設計、合成し、ヒト脳cDNAライブラリーを鋳型にして、PCRを実施した。その結果、δ型受容体のC端側約50%の大きさに相当するクローンを得た。このクローンはδ型と約60%の相同性を持ち、δ型とは明らかに異なる受容体をコードしていると判断された。この受容体のN端側の解析を試みたが、用いたヒト脳cDNAライブラリーからの解析は困難であった。核酸データバンクを検索したところopioid 'orphan' receptorとして登録されているものに類似していた。このため、この受容体の3'側で特異的なプライマーを設計、合成し、ヒト脳のmRNAより逆転写PCRを実施したところ、受容体のN端側を含む447塩基のクローンを得ることができた。これにより、全長約3.0kbの塩基配列を決定した。ところが、このものはごく最近になって報告された疼痛伝達受容体OLR1と同一のものであることが判明した。現在、この受容体がCP-OHの特異的な受容体かを検討すべく、受容体結合試験等を準備している。

オ ピ オ イ ド by let body type delta に は サ ブ タ イ プ が あ り, let body between ク ロ ス ト ー ク に よ り mu type を ア ロ ス テ リ ッ ク に suppression す る と said わ れ て い る. I 々 は recently, three-dimensional restriction ア ミ ノ acid, (2 r, 3 s) - E - シ ク ロ プ ロ ピ ル フ ェ ニ ル ア ラ ニ ン ∇ (Phe) contains を む エ ン ケ フ ァ リ ン inductor CP - OH が こ の delta type サ ブ タ イ プ を recognition, understanding で き る compound で あ る こ と を shown し た. は の purpose, this study こ の サ ブ タ イ プ を ヒ ト 脳 cDNA ラ イ ブ ラ リ ー か ら ス ク リ ー ニ ン グ し て, a structural analytical し を, specific リ ガ ン ド CP - OH の combining site を parsing す る こ と で あ る. ま ず, ヒ ト 脳 delta, mu and kappa type predominate オ ピ オ イ ド by let body の salt base with column の is か ら delta type に の み exist す る with column section を プ ラ イ マ ー と し て し design, synthesis, ヒ ト 脳 cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を type where に し て, PCR を be applied し た. The そ <s:1> result shows that the c-terminal side of the δ type acceptor <s:1> is approximately 50% <s:1> larger than さに さに, which is equivalent to する ロ ロ <s:1> を を を た. こ の ク ロ ー ン は delta type と about 60% gay を hold ち の phase, delta と は Ming ら か に different な る by let body を コ ー ド し て い る と judgment さ れ た. <s:1> <s:1> the n-terminal side of the <s:1> acceptor <e:1> is analyzed by を. Try みたが and use たヒト脳 たヒト脳cDNA. Youdaoplaceholder3 ラ ブラリ ら ら ら ら ら <s:1> is difficult to analyze であった. Youdaoplaceholder6 Nucleic acid デ ー タ バ ン ク を 検 cable し た と こ ろ opioid 'orphan receptor と し て login さ れ て い る も の に similar し て い た. こ の た め, こ の is の let body 3 'side で specific な プ ラ イ マ ー を し design, synthesis, ヒ ト 脳 の mRNA よ り inverse planning write PCR を be applied し た と こ ろ, let body の N end side を contains む 447 salt base の ク ロ ー ン を have る こ と が で き た. Youdaoplaceholder2 れによ を, with a total length of approximately 3.0kb, the <s:1> base arrangement を determines the た. と こ ろ が, こ の も の は ご く recently に な っ て report さ れ た pain 伝 reach let body OLR1 と same の も の で あ る こ と が.at し た. Now, the <s:1> <s:1> acceptor がCP-OH <s:1> specific な acceptor を検 を検 is being discussed すべく, and the acceptor binding experiment and other を are being prepared て て る る.

项目成果

Takeshi Sagara: "Specific Affinity Labeling of μ Opioid Receptors in Rat Brain by S-Activated Sulfhydryldihydromorphine Analogs" Bioorg. Med. Chem. Lett.5 (15). 1609-1614 (1995)

Takeshi Sagara：“S-激活的巯基二氢吗啡类似物对大鼠脑中μ阿片受体的特异性亲和力标记”Bioorg Lett.5 (1995)。

Michio Kondo: "A Tetrameris Analogs for Putative Multivalent Interaction with Opioid Receptors" Bull. Chem. Soc. Jpn.68 (1). 3161-3167 (1995)

Michio Kondo：“与阿片受体假定多价相互作用的四聚体类似物”公牛。

Shihoko Motoyama: "Selective Affinity-labeling of μ Opioid Receptors by Morphiceptin Analogs" Peptide Chemistry 1995. (印刷中). (1996)

Shihoko Motoyama：“通过 Morphiceptin 类似物选择性亲和标记 μ 阿片受体”，肽化学 1995 年。（出版中）。

Teruo Yasunaga: "The Recovery of Affinity-labeled Opioid Receptors to their Intact Farms" Peptide Chemistry 1995. (印刷中). (1996)

Teruo Yasunaga：“将亲和标记的阿片受体恢复到完整的农场”肽化学 1995 年。（出版中）。

Teruo Yasunaga: "Specificity and selectivity in Affinity Labeling of Opioid Receptors by Cysteamine-containing Enkephalin Analogs" Peptide Chemistry 1994. 333-336 (1995)

Teruo Yasunaga：“含半胱胺脑啡肽类似物的阿片受体亲和标记的特异性和选择性”肽化学 1994. 333-336 (1995)