ヒト脳δ型オピオイド受容体サブタイプのcDNAクローニングとリガンド結合部位解析

人脑δ阿片受体亚型的cDNA克隆和配体结合位点分析

• 批准号: 07680653
• 负责人: 下東 康幸
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07680653/
• 关键词: オピオイド受容体; 受容体サブタイプ; cDNAクローニング; エンケファリン

オピオイド受容体δ型にはサブタイプがあり、受容体間クロストークによりμ型をアロステリックに制御すると言われている。我々は最近、立体制約アミノ酸、(2R,3S)-E-シクロプロピルフェニルアラニン(∇Phe)を含むエンケファリン誘導体CP-OHがこのδ型サブタイプを識別・認識できる化合物であることを示した。本研究の目的は、このサブタイプをヒト脳cDNAライブラリーからスクリーニングして、一次構造を解析し、特異リガンドCP-OHの結合部位を解析することである。まず、ヒト脳δ、μ、κ型オピオイド受容体の塩基配列の比較からδ型にのみ存在する配列部分をプライマーとして設計、合成し、ヒト脳cDNAライブラリーを鋳型にして、PCRを実施した。その結果、δ型受容体のC端側約50%の大きさに相当するクローンを得た。このクローンはδ型と約60%の相同性を持ち、δ型とは明らかに異なる受容体をコードしていると判断された。この受容体のN端側の解析を試みたが、用いたヒト脳cDNAライブラリーからの解析は困難であった。核酸データバンクを検索したところopioid 'orphan' receptorとして登録されているものに類似していた。このため、この受容体の3'側で特異的なプライマーを設計、合成し、ヒト脳のmRNAより逆転写PCRを実施したところ、受容体のN端側を含む447塩基のクローンを得ることができた。これにより、全長約3.0kbの塩基配列を決定した。ところが、このものはごく最近になって報告された疼痛伝達受容体OLR1と同一のものであることが判明した。現在、この受容体がCP-OHの特異的な受容体かを検討すべく、受容体結合試験等を準備している。

The receptor delta type is not suitable for use in the treatment of cancer. Recently, we have demonstrated that the stereo-restricted aminophenol,(2R,3S)-E-schikropropirfennel aminophenol (Phe) containing the β-keto-aminophenol inducer CP-OH, can be recognized and recognized as this delta-type compound. The purpose of this study is to analyze the primary structure and the binding site of CP-OH. Comparison of the base alignment of the delta, mu, and kappa type cDNA receptors; design, synthesis, and PCR of the presence of the delta type cDNA receptor As a result, about 50% of the delta receptor on the C-terminal side was obtained. About 60% of the identity of the delta type is maintained, and the delta type is different from the receptor. The N-terminal analysis of this receptor is difficult to achieve. The nucleic acid receptor is similar to the opioid receptor. The 3'side of the receptor is specifically designed, synthesized, and the mRNA of the receptor is reversely written. PCR is carried out on the 3' side of the receptor and the 447 'side of the receptor is obtained. The total length of the gene is about 3.0kb. This is the most recent report of pain in the world. Now, prepare the receptor for CP-OH specific receptor examination, receptor binding test, etc.

项目成果

Takeshi Sagara: "Specific Affinity Labeling of μ Opioid Receptors in Rat Brain by S-Activated Sulfhydryldihydromorphine Analogs" Bioorg. Med. Chem. Lett.5 (15). 1609-1614 (1995)

Takeshi Sagara：“S-激活的巯基二氢吗啡类似物对大鼠脑中μ阿片受体的特异性亲和力标记”Bioorg Lett.5 (1995)。

Michio Kondo: "A Tetrameris Analogs for Putative Multivalent Interaction with Opioid Receptors" Bull. Chem. Soc. Jpn.68 (1). 3161-3167 (1995)

Michio Kondo：“与阿片受体假定多价相互作用的四聚体类似物”公牛。

Shihoko Motoyama: "Selective Affinity-labeling of μ Opioid Receptors by Morphiceptin Analogs" Peptide Chemistry 1995. (印刷中). (1996)

Shihoko Motoyama：“通过 Morphiceptin 类似物选择性亲和标记 μ 阿片受体”，肽化学 1995 年。（出版中）。

Teruo Yasunaga: "The Recovery of Affinity-labeled Opioid Receptors to their Intact Farms" Peptide Chemistry 1995. (印刷中). (1996)

Teruo Yasunaga：“将亲和标记的阿片受体恢复到完整的农场”肽化学 1995 年。（出版中）。

Teruo Yasunaga: "Specificity and selectivity in Affinity Labeling of Opioid Receptors by Cysteamine-containing Enkephalin Analogs" Peptide Chemistry 1994. 333-336 (1995)

Teruo Yasunaga：“含半胱胺脑啡肽类似物的阿片受体亲和标记的特异性和选择性”肽化学 1994. 333-336 (1995)